[发明专利]一种美国白蛾SUMO‑ABP‑dHC‑CecropinA融合蛋白及其应用

摘要

本发明公开了一种美国白蛾SUMO‑ABP‑dHC‑ Cecropin A融合蛋白及其应用，该美国白蛾SUMO‑ABP‑dHC‑ Cecropin A融合蛋白表达方法如下构建pETSUMO‑ABP‑dHC‑ Cecropin A 表达载体，在大肠杆菌中表达，超声破碎后收集上清Ni+亲和纯化，梯度洗脱之后得到美国白蛾SUMO‑ABP‑dHC‑ Cecropin A融合蛋白。本发明通过基因重组方法获得美国白蛾SUMO‑ABP‑dHC‑ Cecropin A融合蛋白，并在大肠杆菌中获得高效表达，目的多肽经过HPLC分析达到大95%的纯度，通过质谱分析，分子量与预测多肽分子量也吻合。经检测，多肽具有明显的抗真菌活性，所制备的目的多肽，其活性高、成本低。

主权项

美国白蛾SUMO‑ABP‑dHC‑Cecropin A融合蛋白在抗真菌活性中的应用；所述的美国白蛾SUMO‑ABP‑dHC‑Cecropin A融合蛋白，由以下步骤获得：1)根据美国白蛾天蚕素A基因序列设计引物A1、A2，以美国白蛾DNA为模板进行PCR，将PCR产物割胶回收，回收产物用Stu1和HindⅢ酶切，SUMO载体只用HindⅢ酶切，T4DNA Ligase连接酶切后的载体和PCR产物，连接产物转化E.coli top10中，获得含pETSUMO‑ABP‑dHC‑Cecropin A重组菌株；挑选阳性重组菌株，扩大培养提取pETSUMO‑ABP‑dHC‑Cecropin A重组质粒，转化到大肠杆菌BL21；2)IPTG浓度0.2mmol/L，低温诱导含有重组载体pETSUMO‑ABP‑dHC‑Cecropin A的大肠杆菌表达菌株BL21，20小时后4℃收菌，冰上超声破碎表达菌体，4℃，13000g，20min离心超声破碎液后，弃沉淀，留上清过Ni+‑NTA柱洗去杂蛋白，收集目的多肽透析过滤除菌后保存；其中，美国白蛾ABP‑dHC‑Cecropin A融合蛋白的编码基因序列如SEQ ID NO.1所示；所述的应用为SUMO‑ABP‑dHC‑Cecropin A融合蛋白经SUMO酶切SUMO标签获得的ABP‑dHC‑Cecropin A在抗真菌活性中的应用。