[发明专利]一种胃蛋白酶原Ⅰ和Ⅱ的联合检测方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种胃蛋白酶原Ⅰ和Ⅱ的联合检测方法及试剂盒，尤其涉及一种胃蛋白酶原Ⅰ和Ⅱ的双波长荧光免疫层析联合检测方法及其检测试剂盒。包括以下步骤：1)免疫层析试纸条制备；2)冻干探针制备；3)样品稀释液制备；4)样品检验；本发明的胃蛋白酶原Ⅰ的检测方法及试剂盒，灵敏度高、准确度高、操作简单、成本低。

主权项

一种胃蛋白酶原Ⅰ和Ⅱ的双波长荧光免疫层析联合检测方法，其特征在于：包括以下步骤：1)免疫层析试纸条制备：将胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体、胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体和鸡IgY分别包被在层析试纸的检测线1、检测线2和控制线上，经干燥、切割后得到免疫层析试纸条；2)冻干探针制备：将两种不同发射光波长的荧光胶乳微粒溶液按比例混合，混合均匀后加入活化剂反应一段时间，离心、洗涤后得到活化荧光胶乳微粒；将胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体、胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体和羊抗鸡IgY分别按比例与活化荧光胶乳微粒偶联反应一段时间，得到胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体荧光胶乳微粒、胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体荧光胶乳微粒以及羊抗鸡IgY荧光胶乳微粒；随后将胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体荧光胶乳微粒、胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体荧光胶乳微粒与羊抗鸡IgY荧光胶乳微粒按一定比例混合得到混合荧光胶乳微粒，随后加入硅藻糖水溶液稀释，冻干后保存为冻干探针；3)样品稀释液制备：样品稀释液为含有牛血清白蛋白、蛋白保护剂、表面活性剂和防腐剂的缓冲液；4)样品检验：将血清样品与冻干探针混合分散一段时间后，取出一定量加入样品稀释液中，待混合均匀后滴加至免疫层析试纸条上进行免疫层析反应；随后在荧光检测器下采用与两种荧光胶乳微粒相对应的两种发射光波长进行荧光检测。