[发明专利]梅毒螺旋体特异性抗体高通量检测试剂盒及其制备方法

摘要

梅毒螺旋体特异性抗体高通量检测试剂盒及其制备方法，涉及梅毒螺旋体。试剂盒设有外包装盒、碱性磷酸酶标记抗人γ单克隆抗体瓶、碱性磷酸酶标记抗人μ单克隆抗体瓶、碱性磷酸酶标记抗人Ig单克隆抗体瓶、发光底物瓶、梅毒螺旋体特异性抗体阴性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性IgG抗体阳性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性IgM阳性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性总抗体阳性对照品瓶、洗涤液瓶、重组抗原包被微孔板。先制备梅毒螺旋体特异性重组抗原、重组抗原包被微孔板、抗人γ链单克隆抗体、抗人μ链单克隆抗体、抗人Ig单克隆抗体；标记抗体的碱性磷酸酶，再制备发光底物、洗涤液、对照品，最后组装梅毒螺旋体特异性抗体高通量检测试剂盒。

主权项

梅毒螺旋体特异性抗体高通量检测试剂盒，其特征在于设有外包装盒、碱性磷酸酶标记抗人γ链单克隆抗体瓶、碱性磷酸酶标记抗人μ链单克隆抗体瓶、碱性磷酸酶标记抗人Ig单克隆抗体瓶、发光底物瓶、梅毒螺旋体特异性抗体阴性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性IgG抗体阳性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性IgM阳性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性总抗体阳性对照品瓶、洗涤液瓶、重组抗原包被微孔板；碱性磷酸酶标记抗人γ链单克隆抗体瓶、碱性磷酸酶标记抗人μ链单克隆抗体瓶、碱性磷酸酶标记抗人Ig单克隆抗体瓶、发光底物瓶、梅毒螺旋体特异性抗体阴性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性IgG抗体阳性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性IgM阳性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性总抗体阳性对照品瓶、洗涤液瓶、重组抗原包被微孔板设在外包装盒内；碱性磷酸酶标记抗人γ链单克隆抗体瓶内装有碱性磷酸酶标记抗人γ链单克隆抗体，碱性磷酸酶标记抗人μ链单克隆抗体瓶内装有碱性磷酸酶标记抗人μ链单克隆抗体，碱性磷酸酶标记抗人Ig单克隆抗体瓶内装有碱性磷酸酶标记抗人Ig单克隆抗体，发光底物瓶内装有发光底物，梅毒螺旋体特异性抗体阴性对照品瓶内装有梅毒螺旋体特异性抗体阴性对照品，梅毒螺旋体特异性IgG抗体阳性对照品瓶内装有梅毒螺旋体特异性IgG抗体阳性对照品，梅毒螺旋体特异性IgM阳性对照品瓶内装有梅毒螺旋体特异性IgM阳性对照品，梅毒螺旋体特异性总抗体阳性对照品瓶内装有梅毒螺旋体特异性总抗体阳性对照品，洗涤液瓶内装有洗涤液；所述梅毒螺旋体特异性抗体高通量检测试剂盒由以下方法制备：1)制备梅毒螺旋体特异性重组抗原：采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表达，得梅毒螺旋体特异性抗原TPN17和TPN47；2)制备重组抗原包被微孔板将步骤1)中的梅毒螺旋体重组抗原TPN17和TPN47用包被缓冲液稀释至20μg/mL，以每孔0.1mL加入微孔板中，4℃包被24h；取出抗原板，风干；用0.01mmol/L pH7.4磷酸盐缓冲液配制的1.0％脱脂奶粉，每孔0.2mL，4℃封闭24h，取出用磷酸盐缓冲液洗涤5次，室温风干、消毒，制备重组抗原包被微孔板，密封备用；3)制备抗人γ链单克隆抗体以人γ链为抗原免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术，筛选获得稳定分泌抗人γ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株；4)制备抗人μ链单克隆抗体以人μ链为抗原免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术，筛选获得稳定分泌抗人μ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株；5)制备抗人Ig单克隆抗体以人Ig为抗原免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术，筛选获得稳定分泌抗人Ig单克隆抗体的杂交瘤细胞株；6)抗体的碱性磷酸酶标记碱性磷酸酶经过碘酸钠活化，分别与步骤3)、4)、5)中所制备的单克隆抗体分子的‑NH₂偶联，形成碱性磷酸酶标记抗人Ig单克隆抗体、碱性磷酸酶标记抗人μ链单克隆抗体和碱性磷酸酶标记抗人γ链单克隆抗体；7)发光底物制备人工合成金刚烷胺类发光底物及其增强剂，均经无菌过滤，制备发光底物工作液；8)洗涤液制备洗涤液为溶有Tween‑20的磷酸盐缓冲液，其中Tween‑20的终浓度为0.01％；9)对照品梅毒螺旋体特异性抗体阴性对照品：由非梅毒感染的健康人群血清配制而成；梅毒螺旋体特异性IgG抗体阳性对照品：梅毒患者的特异性IgG抗体阳性血清配制而成；梅毒螺旋体特异性IgM阳性对照品：梅毒患者的特异性IgM阳性血清配制而成；梅毒螺旋体特异性总抗体阳性对照品：梅毒患者的特异性总抗体阳性血清配制而成；10)制备梅毒螺旋体特异性抗体高通量检测试剂盒将碱性磷酸酶标记抗人γ链单克隆抗体、碱性磷酸酶标记抗人μ链单克隆抗体、碱性磷酸酶标记抗人Ig单克隆抗体、发光底物、洗涤液、梅毒螺旋体特异性抗体阴性对照品、梅毒螺旋体特异性IgM阳性对照品、梅毒螺旋体特异性总抗体阳性对照品分别装入瓶内，再将碱性磷酸酶标记抗人γ链单克隆抗体瓶、碱性磷酸酶标记抗人μ链单克隆抗体瓶、碱性磷酸酶标记抗人Ig单克隆抗体瓶、发光底物瓶、梅毒螺旋体特异性抗体阴性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性IgG抗体阳性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性IgM阳性对照品瓶、梅毒螺旋体特异性总抗体阳性对照品瓶、洗涤液瓶和重组抗原包被微孔板装入外包装盒，即得梅毒螺旋体特异性抗体高通量检测试剂盒。