[发明专利]人源沉默信息调节因子6的活性荧光检测方法

摘要

本发明公开了一种人源沉默信息调节因子6的活性荧光筛选方法，本发明利用含有荧光基团与淬灭基团（FRET效应）、且含有长链脂肪酰化赖氨酸残基的多肽为底物，将荧光强度与Sirtuin6的酶活性关联起来，FRET效应可以使底物长链脂肪酰化赖氨酸这一Sirtuin6识别位点位于底物的中部，这样一来，使得底物多肽更接近于Sirtuin6的天然底物，结合更紧密 ；同时，可以给予更多选择的荧光基团，最终，可以得到更可靠的筛选结果。这样的方法可应用于Sirtuin6调节剂的筛选，或是生物样本中的Sirtuin6活性检测，具有微型化、自动化、快速可靠等特点，适用于高通量的应用，也可应用于新型Sirtuin6活性检测试剂盒的开发和开展Sirtuin6调节剂的筛选服务。

主权项

一种人源沉默信息调节因子6的活性荧光筛选方法，其特征在于：以含有荧光基团与荧光淬灭基团、且含有长链脂肪酰化赖氨酸残基的多肽为底物， 1）将所述底物与人源沉默信息调节因子6孵育，脱去底物的赖氨酸残基上的长链脂肪酰化修饰，得到无修饰的赖氨酸多肽；2）将所述的无修饰的赖氨酸多肽与蛋白水解酶裂解液孵育，从赖氨酸的C端裂解肽键；使荧光强度与上述的无修饰的赖氨酸多肽关联起来，该检测得到荧光强度与人源沉默信息调节因子6的酶活性具有相关性。