[发明专利]一种鱼类软骨生产硫酸软骨素联产水解胶原蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种鱼类软骨生产硫酸软骨素联产水解胶原蛋白的方法，其步骤包括：一、预处理；二、酶解；三、热处理/过滤浓缩；四、树脂吸附；五、精制硫酸软骨素；六、回收蛋白。本发明采用复合酶水解技术，实现硫酸软骨素和胶原蛋白的同步水解。将硫酸软骨素释放出来的同时将鱼类软骨中的胶原蛋白部分水解；将传统硫酸软骨素生产的大量蛋白质污染物回收利用，实现了硫酸软骨素和水解胶原蛋白的同步生产，实现了鱼类软骨的综合利用，同时节能减排，经济效益和社会效益显著。

主权项

一种鱼类软骨生产硫酸软骨素联产水解胶原蛋白的方法，其特征在于，步骤包括 ：一、预处理：取新鲜鱼骨用水浸泡3h 后置于蒸煮锅中100℃煮30min，捞出后剔除鱼肉和油脂，用清水冲洗，切碎成大小为1cm×1cm的块状，称重备用；二、酶解：将预处理的软骨按料液比1:2加入pH=8.5的水溶液，加入酶水解，在水解过程中应不断调节溶液pH保持在8.0‑8.5；三、热处理 / 过滤浓缩：热处理是在酶解液中加入稀盐酸或磷酸调整溶液pH值，加热升高温度至溶液分层，继续加热30min，放置过滤，除去未水解酸性蛋白，溶液分层过滤后浓缩 ；四、树脂吸附：滤液浓缩后经离子交换树脂连续交换吸附，乙酸‑乙酸钠缓冲液洗脱，收集洗脱液；五、精制硫酸软骨素：洗脱液经双氧水脱色后加入2倍体积的分析纯酒精沉淀得到硫酸软骨素，沉淀离心后置于恒温干燥箱中，控温 60℃干燥 4h 得纯品硫酸软骨素 ；六、回收蛋白：树脂吸附后的未结合的水解蛋白质溶液经喷雾干燥，回收制备水解蛋白粉；所述步骤二中水解完全程度的判定是：取少许水解液滴加 50g/L三氯醋酸观察溶液混浊程度确定；所述步骤二中加入的酶是木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和复合酶，添加比例为1 ：2 ：1；所述步骤二中，酶解时间为2‑6h，酶解温度为37‑65℃，酶用量为2‑10g/kg；所述步骤三中，酶解后热处理的温度为70‑90℃，pH 为3.0‑4.5；所述步骤四中树脂吸附过程中采用的树脂为D001‑cc树脂，装于3支3×25cm层析柱中，分别用 pH6.0、pH5.0、pH4.0 的乙酸 ‑ 乙酸钠缓冲液平衡树脂，至流出液与洗脱液 pH 值相同，平衡完成，上样洗脱 ：分别加入上述硫酸软骨素层析液 20mL，至层析液完全进入树脂后，用洗脱液淋洗柱壁 2 次，再分别用 pH4.0、pH5.0、pH6.0 的乙酸 ‑ 乙酸钠缓冲液洗脱，流速 60mL/h，收集流出液，将乙醇加入上述离子交换层析液中至乙醇含量达 75%，硫酸软骨素析出，过滤，乙醇洗涤 2 次，烘干，得硫酸软骨素纯品”。