[发明专利]一种山药原生质体的制备及纯化方法在审
| 申请号： | 201410652045.7 | 申请日： | 2014-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN104357376A | 公开（公告）日： | 2015-02-18 |
| 发明（设计）人： | 张敏跃 | 申请（专利权）人： | 张敏跃 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 南京苏科专利代理有限责任公司 32102 | 代理人： | 陈忠辉 |
| 地址： | 210008 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种山药原生质体制备及纯化方法。选取山药幼叶，消毒处理；将叶片切成细条放入酶解液，黑暗条件下酶解去除细胞壁；酶解混合物在水平摇床上处理，充分释放原生质体；然后用尼龙网膜将酶解混合物过滤至离心管，过滤产物离心后弃上清，加入洗涤液，轻缓颠倒使细胞悬浮；离心分离原生质体，去上清，加入原生质体保存液，重新悬浮细胞后静置，使原生质体自然沉降；最后吸取上层细胞悬液，得到纯化的山药原生质体。本发明原材料易得，消毒方法对外植体的损伤较小，消毒效果好，污染率低；针对山药叶片特性优化了酶解体系和条件，获得的原生质体产量大，活性高；采用自然沉降的方法，可减少细胞碎片等杂质，获得较高纯度的原生质体。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 山药 原生 质体 制备 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种山药原生质体的制备及纯化方法，其特征在于：首先选取山药幼叶，消毒处理；然后将叶片切成细条放入酶解液中，在黑暗条件下酶解去除细胞壁；接着将酶解混合物在水平摇床上处理，使原生质体充分释放；用尼龙网膜将酶解混合物过滤至离心管中，将过滤产物离心后弃上清；加入洗涤液，轻缓颠倒使悬浮细胞；离心分离原生质体，去上清；再加入原生质体保存液，重新悬浮细胞后静置，使原生质体自然沉降；最后吸取上层细胞悬液，得到纯化的山药原生质体。
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