[发明专利]一种HIV-1大量感染复制的单核巨噬细胞模型的构建方法

摘要

本发明公开了一种HIV-1大量感染复制的单核巨噬细胞模型的构建方法，首先针对SAMHD1基因CDS1设计1对识别序列，构建一对TALEN质粒对；然后将TALEN质粒对转染到单核巨噬细胞系THP-1细胞内；并在含有浓度为100ug/ml的G418的1640培养基中培养10-14天以筛选出转染成功的活细胞；将活细胞进行有限稀释后，通过基因测序筛选出SAMHD1基因靶位点移码突变的克隆，得到HIV-1大量感染复制的单核巨噬细胞。所述方法构建的THP-1细胞模型能够允许HIV-1大量感染和复制，为HIV-1感染单核巨噬细胞研究提供理想的细胞模型。

主权项

一种HIV‑1大量感染复制的单核巨噬细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）针对SAMHD1基因的CDS1选取作用靶点，并设计1对识别序列L/R，L的序列如SEQ ID NO.11所示，R的序列如SEQ ID NO.12所示；（2）将靶点识别单元模块的基因片段分别按照L/R序列进行串联，串联成功后克隆入pCAG‑T7‑TALEN(Sangamo)‑ Destination质粒，共构建一对TALEN表达质粒对；其中，靶点识别单元模块的基因片段按照L序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；按照R序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；（3）通过电转染法将步骤2得到的TALEN质粒对转染到对数生长期的单核巨噬细胞系THP‑1细胞内；（4）转染48小时后，将THP‑1细胞在含有浓度为100ug/ml新霉素的1640培养基中培养10‑14天；筛选出活细胞，用有限稀释法对每个活细胞进行克隆化培养，得到单细胞克隆的细胞群；（5）对上述细胞群进行基因测序，挑选出SAMHD1基因靶位点移码突变的细胞，即为HIV‑1大量感染复制的单核巨噬细胞。