[发明专利]一种弗氏柠檬酸杆菌检测试纸条及其制备方法

摘要

本发明公开了一种弗氏柠檬酸杆菌检测试纸条及其制备方法，包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC底板，特点是在PVC底板上按顺序依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，该结合垫上包被有所述的抗弗氏柠檬酸杆菌卵黄抗体一胶体金标记物，该硝酸纤维素膜上分别包被有弗氏柠檬酸杆菌超声波破碎液构成的检测线和兔抗鸡卵黄抗体构成的质控线，优点是灵敏度高、特异性强、操作简便、检测快速、准确性高。

主权项

1.一种弗氏柠檬酸杆菌检测试纸条，其特征在于：所述的试纸条由PVC底板和在PVC底板上依次搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水垫构成；所述的结合垫上包被有抗弗氏柠檬酸杆菌卵黄抗体‑胶体金标记物，所述的硝酸纤维素膜上分别设置有由弗氏柠檬酸杆菌超声波破碎液包被的检测线和由兔抗鸡卵黄抗体IgY包被的质控线；所述的弗氏柠檬酸杆菌超声波破碎液的包被量为1‑2μL/cm；所述的兔抗鸡卵黄抗体的包被量为1‑2μL/cm，所述的弗氏柠檬酸杆菌超声波破碎液是将弗氏柠檬酸杆菌抗原用PBS重悬，经超声波破碎后4000rpm离心5min所得的上清液；所述的检测线距离所述的结合垫6‑8mm；所述的质控线距离所述的吸水垫6‑8mm，所述的检测线和所述的质控线的宽度分别为0.8‑1mm，两条线相距为5mm；所述的弗氏柠檬酸杆菌检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：(1)样品垫的制备将玻璃纤维纸浸泡于含1wt％牛血清白蛋白、2.5wt％蔗糖、1wt％海藻糖、1wt％吐温‑20的pH 7.2的0.01M PBS缓冲液中30min后取出，于37℃干燥2‑3h即得到样品垫，真空封装，4℃保存备用；(2)特定包被的结合垫的制备将玻璃纤维纸浸泡于含1wt％牛血清白蛋白、2.5wt％蔗糖、1wt％海藻糖，1wt％吐温‑20的pH7.2的0.01M PBS缓冲液中30min后，于37℃干燥1‑2h后，在每平方厘米的玻璃纤维纸上均匀喷涂10‑20μL的抗弗氏柠檬酸杆菌卵黄抗体‑胶体金标记物，真空冷冻干燥1‑2h，即得到结合垫，真空封装，4℃保存备用；(3)特定包被的硝酸纤维素膜的制备将弗氏柠檬酸杆菌超声波破碎液用点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上形成检测线；将兔抗鸡卵黄抗体用点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上形成质控线，即得到特定包被的硝酸纤维素膜，真空冷冻干燥1‑1.5h，真空封装，4℃保存备用；其中检测线与质控线相互平行，所述的检测线靠近结合垫端，所述的质控线靠近吸水垫端；(4)试纸条的制备将步骤(1)得到的样品垫、步骤(2)得到的特定包被的结合垫、步骤(3)得到的特定包被的硝酸纤维素膜和吸水垫按序搭接并粘贴于底板上，裁成4‑6mm宽的细条，即得弗氏柠檬酸杆菌检测试纸条，真空封装，4℃保存；所述的抗弗氏柠檬酸杆菌卵黄抗体‑胶体金标记物的制备方法如下：将抗弗氏柠檬酸杆菌卵黄抗体与胶体金颗粒直径为20‑40nm的胶体金溶液按5‑7μg：1mL混合，在pH 5.4的条件下通过搅拌振荡30‑60min，加含10wt％的牛血清白蛋白的PBST缓冲液作为稳定剂，采用低速离心2000‑3500rpm，10‑20min，再高速离心12000‑15000rpm，1‑1.5h，取离心管底部暗红色沉淀即得到抗弗氏柠檬酸杆菌卵黄抗体‑胶体金标记物，用含1wt％牛血清白蛋白、2.5wt％蔗糖、1wt％海藻糖，0.02wt％叠氮化钠的pH 7.2的0.01M PBS缓冲液重悬至所述胶体金溶液体积的1/10‑1/20作为其工作浓度；所述的胶体金颗粒的制备方法如下：将100mL 0.01wt％的氯金酸溶液，加热煮沸后，边搅拌边加入1‑2mL 1wt％柠檬酸三钠迅速摇匀，继续加热，溶液由淡黄色变黑变红色，至颜色稳定后继续加热5‑10min，冷却后补足失水至100mL，无菌密封，4℃避光保存。