[发明专利]一种分子克隆大肠杆菌DH5α感受态细胞的简易制备方法在审
| 申请号： | 201410659417.9 | 申请日： | 2014-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN104357372A | 公开（公告）日： | 2015-02-18 |
| 发明（设计）人： | 孙会忠;王小东;宋月芹;董钧锋;朱金峰 | 申请（专利权）人： | 河南科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/36 | 分类号： | C12N1/36;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 471023 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种分子克隆大肠杆菌DH5α感受态细胞的简易制备方法，该方法将菌液直接分装于预冷的1.5ml小型离心管中，规避了传统感受态制备方法对大型冷冻离心机的依赖；菌液在CaCl2溶液处理前分装，可有效降低后续操作对已处于感受态菌体细胞的影响；压缩两次CaCl2溶液加入为一次性加入，简化了操作步骤，也有减少对已处于感受态菌体影响的作用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 分子 克隆 大肠杆菌 dh5 感受态 细胞 简易 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种分子克隆大肠杆菌DH5α感受态细胞的简易制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从铺有大肠杆菌DH5α的平板中挑选一个单菌落，接种到2ml LB液体培养基中，37℃，220r/min培养过夜；(2)吸取200μl菌液转接到装有20ml LB液体培养基三角瓶中，37℃摇床培养至菌体细胞的OD600值为0.3‑0.5；(3)将菌液分装于15个1.5ml预冷的无菌离心管中，每管装1.5ml菌液，冰浴20min；4℃，4000r/min离心10min，弃上清；(4)每管加入200μl 0.1mol/L CaCl2溶液，轻柔吹吸，悬浮细胞，冰浴20min；直接用于转化实验或0‑4℃贮存，5天内可用。
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