[发明专利]一种人体血清miRNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种人体血清miRNA的提取方法，主要针对实验室常用的Trizol法提取血清miRNA的纯度和浓度较低进行优化，优化环节包括血清的制备、血清的预处理和具体的提取过程。优化后的方法操作步骤简单、成本较低，效果较好，稳定性也较好，尤其是血清经过预处理后，效果尤为明显，所得血清miRNA纯度高（OD₂₆₀/OD₂₈₀值为1.85-1.95）且产率也较高（RNA提取率为45-60μg/ml血清），用qRT-PCR检测血清的内参基因miR-16的Ct值在24-26之间，表明该方法提取的血清miRNA完全满足qRT-PCR的需要。

主权项

一种人体血清miRNA的提取方法，其特征在于包括以下步骤：（1）人体血清的制备，使用血清采集管采集静脉空腹血，颠倒混匀后，于30‑38℃温浴10‑30min，室温2000‑5000rpm离心3‑10min；（2）人体血清的预处理，取步骤（1）制得的人体血清，添加灭菌的体积浓度为0.1%的焦炭酸二乙酯水溶液，并混合均匀，其中人体血清与焦炭酸二乙酯水溶液的体积配比为1:1‑10；（3）人体血清miRNA的提取，向步骤（2）预处理的人体血清中加入等体积的Trizol，室温放置5min后，加入1/5 Trizol体积的氯仿，剧烈震荡并室温放置2‑3min后，4℃ 12000×g离心15min，取上清液至新的离心管中，加入1/2 Trizol体积的异丙醇以沉淀RNA，并于‑20℃放置0.5‑12h后于4℃ 12000×g离心10min，然后倒掉上清，加入与Trizol等体积的体积浓度为75%的乙醇洗涤沉淀，4℃ 7500×g离心5min后倒掉上清，4℃ 12000×g离心2min，将残留乙醇用吸头除尽，并于室温放置使乙醇彻底挥发，然后用灭菌的体积浓度为0.1%的焦炭酸二乙酯水溶液于55‑60℃温浴15min充分溶解RNA，用于检测纯度和含量，并经反转录后用于qRT‑PCR检测。