[发明专利]一种双基因稳定表达的组织工程骨及其制备方法

摘要

本发明涉及一种组织工程化骨，具体地说关于一种双基因稳定表达的组织工程化骨及其制备方法。本发明的技术方案如下一种Ne11‑1与VEGF稳定表达的脂肪来源间充质干细胞构建组织工程化骨，它由下列方法制得(1)质粒介导的Ne11‑1与VEGF基因协同转染体外培养的脂肪来源间充质干细胞，并对细胞传代检测其表达情况；(2)将步骤(1)得到的细胞系与载有硫酸软骨素的胶原基骨修复材料共同培养，即获得能够稳定表达Ne11‑1与VEGF基因的组织工程骨。本发明优点表现在Ne11‑1与VEGF基因协同修饰的添加硫酸软骨素的胶原基组织工程化骨，新骨形成效果优于BMP2、Ne11‑1或VEGF单独修饰的普通组织工程骨。

主权项

一种双基因稳定表达的组织工程骨，它由下列方法制得：(1)构建Nell‑1与对BMP、BFGF、OPG基因有调节作用的VEGF基因的真核表达质粒，通过转染体外培养扩增的大鼠ADSCs，载体工作浓度为10～100pfu/细胞，获得稳定表达Nell‑1与VEGF基因的ADSCs细胞系，Nell‑1与VEGF蛋白表达浓度在3mg/mL以上；(2)构建胶原蛋白与Ca2+的自组装体系，并在反应体系中添加终浓度为0.01％～0.1％的硫酸软骨素，反应完成后抽滤，获得载有硫酸软骨素的胶原基仿生骨基质材料；(3)将(1)中的构建的细胞密度为1×107/mL～1×109/mL的稳定表达Nell‑1与VEGF基因的ADSCs细胞系与(2)中得到的体积为2～20cm3的胶原基仿生骨基质材料共同培养，最终获得Nell‑1与VEGF协同修饰脂肪来源干细胞构建组织工程化骨。