[发明专利]一种高效的细菌转化方法

摘要

本发明公开了一种高效的细菌转化方法，其主要内容包括：(1)纳米氧化铝可用于细菌的转化；(2)革兰氏阴性菌HB101、K12可基于纳米氧化铝作用发生转化；(3)革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌可基于纳米氧化铝作用发生转化。本发明的技术和方法不要求低温条件，室温即可实现；本发明步骤简便，无热激步骤；本发明高效，细菌转化效率高于统CaCl₂法；本发明不但能实现革兰氏阴性菌转化，也可以实现革兰氏阳性菌转化。因此本发明中的技术和方法简单、高效、通用，非常适合实验室科研及工程菌制备等领域。

主权项

1.一种细菌转化方法，其特征包括以下步骤：(1)挑取新活化的细菌单克隆，接种到10ml LB培养基，在37℃、210rpm条件下振荡培养至OD₆₀₀为1；(2)将(1)中的菌体按1％接种到10ml LB培养基，在37℃、210rpm条件下振荡培养12h；(3)用LB培养基将(2)中的菌体稀释100倍，取1.5ml菌体稀释液置于灭菌的1.5ml离心管中，在室温下5000rpm离心菌液10min，弃上清收集细菌；(4)向离心管中加入浓度10mmol/L、颗粒直径小于50nm的纳米氧化铝100μl，并与细菌细胞振荡混匀，室温下静止作用9h；(5)将菌液过0.22μm微孔滤膜，滤除去纳米氧化铝颗粒；(6)灭菌生理盐水冲洗微孔滤膜回收细胞，在室温下5000rpm离心菌液10min，弃上清去除残留的纳米氧化铝；(7)用100μl生理盐水重悬菌体细胞备用；(8)加入100ng质粒DNA，涡轮振荡2min；(9)加LB培养基900μl，在37℃、210rpm条件下振荡复苏1h；(10)菌液涂布在含有相应抗生素的选择性平板上，37℃培养，生长的菌落即为转化成功的克隆。