[发明专利]一种体外酶反应生成1,2,4‑丁三醇的方法及应用

摘要

本发明公开了一种体外酶反应生成1,2,4‑丁三醇的方法及应用，属于生物工程技术领域。本发明所提供的方法是分别构建过表达D‑木糖酸脱水酶基因、2‑酮酸脱羧酶基因和醇脱氢酶基因的基因工程菌，发酵培养所得基因工程菌后，再利用超声波破碎菌体，收集粗酶液，混合调整D‑木糖酸脱水酶、2‑酮酸脱羧酶和醇脱氢酶浓度后，加入反应底物后合成1,2,4‑丁三醇。本发明所提供的方法实现了在体外通过控制酶反应以D‑木糖酸为原料合成1,2,4‑丁三醇，具有便于扩大生产的特点，扩大后产量可达到5.98g/L。

主权项

一种体外酶反应生成1,2,4‑丁三醇的方法，其特征在于，步骤如下：1)分别将D‑木糖酸脱水酶基因yjhG、2‑酮酸脱羧酶基因mdlC和醇脱氢酶基因adhP导入到大肠杆菌中获得三种基因工程菌；所述D‑木糖酸脱水酶基因yjhG，GenBank登录号为12931979；所述2‑酮酸脱羧酶基因mdlC，GeneBank登录号AAC15502.1；所述醇脱氢酶基因adhP，GeneBank登录号为946036；2)发酵培养步骤2)所得的三种基因工程菌，分别过表达D‑木糖酸脱水酶、2‑酮酸脱羧酶和醇脱氢酶；3)利用超声波破碎步骤2)所培养的基因工程菌，收集粗酶液；4)混合步骤3)所得的粗酶液，调整混合液中D‑木糖酸脱水酶、2‑酮酸脱羧酶和醇脱氢酶的浓度，加入D‑木糖酸后，合成1,2,4‑丁三醇；所述调整浓度是将D‑木糖酸脱水酶的浓度调整为0.39‑0.5mg/ml，2‑酮酸脱羧酶的浓度调整为0.05‑0.5mg/ml，醇脱氢酶的浓度调整为0.39mg/ml。