[发明专利]一种聚乙烯醚羧酸盐双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术

摘要

一种聚乙烯醚羧酸盐双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术，属于生化分离工程技术领域。本发明步骤为：聚乙烯醚羧酸盐的制备；双水相萃取藻蓝蛋白；藻蓝蛋白水溶液进浓缩和冷冻干燥后获得藻蓝蛋白粉；蛋白回收率可达70～90％。该方法简单，对螺旋藻破壁液直接使用聚乙烯醚羧酸盐进行富集分离，简化了纯化过程的步骤，选择性高，分离得到的藻蓝蛋白的光谱纯度达到A₆₂₀/A₂₈₀>2.7。原料可采用螺旋藻鲜藻或干藻粉，从而提供了一种解决螺旋藻资源高值规模化利用的技术方法。

主权项

一种聚乙烯醚羧酸盐双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术，其特征在于步骤为：聚乙烯醚羧酸盐的制备；双水相萃取藻蓝蛋白；藻蓝蛋白水溶液经浓缩和冷冻干燥后获得藻蓝蛋白粉。(1)聚乙烯醚羧酸盐的制备：在圆底烧瓶中放入聚乙二醇和钠块，钠块与聚乙二醇的重量比为0.02～0.05:1，在25℃～45℃和磁力搅拌条件下反应5～8小时，在反应混合物中缓慢滴入无水乙醇，直至烧瓶中的钠块消除，然后在反应混合物中加入200～500ml的N,N‑二甲基甲酰胺和5.8～24g氯乙酸钠，在90～120℃下反应15～24小时，然后在80～100℃下真空蒸馏1小时，加入200～500ml无水乙醇，过滤获得聚乙烯醚羧酸盐。(2)两相萃取：在螺旋藻破壁清液中加入聚乙烯醚羧酸盐和无机盐，聚乙烯醚羧酸盐:无机盐:破壁清液的重量比为0.05～0.25:0.2～0.35:1，震荡混合2分钟，静置分相，藻蓝蛋白富集于上相。(3)将上述含藻蓝蛋白的上相经截留分子量为30000道尔顿的超滤膜过滤，去除聚乙烯醚羧酸盐和无机盐，获得藻蓝蛋白水溶液，纯度为2.8～3.7，蛋白浓度为3.15～5.6mg/ml。(4)将藻蓝蛋白水溶液在60℃下真空浓缩至原体积三分之一，冷冻干燥后得到藻蓝蛋白粉末。