[发明专利]一种聚乙烯醚醇胺双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术

摘要

一种聚乙烯醚醇胺双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术，属于生化分离工程技术领域。本发明步骤为：聚乙烯醚醇胺的制备；双水相萃取藻蓝蛋白；藻蓝蛋白水溶液经浓缩和冷冻干燥后获得藻蓝蛋白粉；蛋白回收率可达75～87％。该方法简单，对螺旋藻破壁液直接使用聚乙烯醚醇胺进行富集分离，简化了纯化过程的步骤，选择性高，分离得到的藻蓝蛋白的光谱纯度达到A₆₂₀/A₂₈₀>2.4。原料可采用螺旋藻鲜藻或干藻粉，从而提供了一种解决螺旋藻资源高值规模化利用的技术方法。

主权项

一种聚乙烯醚醇胺双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术，其特征在于步骤为：聚乙烯醚醇胺的制备；双水相萃取藻蓝蛋白；藻蓝蛋白水溶液经浓缩和冷冻干燥后获得藻蓝蛋白粉。(1)聚乙烯醚醇胺的制备：在圆底烧瓶中放入聚乙二醇，恒压漏斗中装入三溴化磷，三溴化磷与聚乙二醇的重量比为1:2～3，在磁力搅拌下将三溴化磷缓慢滴入圆底烧瓶中，滴加时间为0.5小时，滴加完毕后，升温至60～90℃反应5～8小时，在反应混合物中缓慢滴入去离子水，直至烧瓶中的黄色蒸气消除，然后在反应混合物中加入500～1000ml二氯甲烷，转移至分液漏斗中，用250ml的25％碳酸钠水溶液洗涤三次，收集下层液体，将下层溶液蒸馏去除二氯甲烷后得到溴代聚乙烯醚。在溴代聚乙烯醚中，加入醇胺，醇胺与溴代聚乙烯醚之间重量比为1:2～5，在70～90℃下反应4～6小时，然后升温至120～140℃反应12～16小时，将反应物中在80～100℃下真空蒸馏1小时，加入500～1000ml无水乙醇，过滤获得聚乙烯醚醇胺。(2)双水相萃取：在螺旋藻破壁清液中加入聚乙烯醚醇胺和无机盐，聚乙烯醚醇胺:无机盐:破壁清液的重量比为0.05～0.35:0.25～0.4:1，震荡混合2分钟，静置分相，藻蓝蛋白富集于上相。(3)将上述含藻蓝蛋白的上相经截留分子量为30000道尔顿的超滤膜过滤，去除聚乙烯醚醇胺和无机盐，获得藻蓝蛋白水溶液，纯度为2.4～4.2，蛋白浓度为4.15～6.6mg/ml。(4)将藻蓝蛋白水溶液在60℃下真空浓缩至原体积三分之一，冷冻干燥后得到藻蓝蛋白粉末。