[发明专利]一种L-天冬氨酸制取工艺

摘要

本发明公开了一种L-天冬氨酸制取工艺，其工艺步骤为：(1)选育菌株；(2)细胞固定化；(3)转化；(4)修饰：取1g右旋糖苷溶于15ml蒸馏水，另取一定量NaIO4溶于10ml热水中，将两溶液混合，于4℃冰箱反应18h，室温下以蒸馏水透析4h后，再以5LpH7.4的0.1mol/L磷酸钠缓冲液透析，将透析后的液体加入到步骤(3)的转化液中，混合充分，得到混合液；(5)制取粗品；(6)结晶，本发明的L-天冬氨酸能够在短时间内大量生产，修饰之后，抗原性弱，不会引起人体的免疫反应，药效好，固定化生产，稳定性好，适于推广应用。

主权项

一种L‑天冬氨酸制取工艺，其特征在于，其工艺步骤如下：(1)选育菌株：选用大肠杆菌作为天冬氨酸酶的来源，用肉汁培养基培养种子，接种与摇瓶培养基中，于32℃下振摇培养12h，逐级扩大培养至1000‑2000L规模后，用1mol/L的HCl调pH至5.0，保温42℃，2h后，冷却至室温，于转筒式高速离心机内离心，收集含有天冬氨酸酶的菌体；(2)细胞固定化：取大肠杆菌湿菌体15kg，悬浮于离心后的培养清液80L中或80L生理盐水，保温35℃再加入90L保温35℃的1896明胶溶液和1.0％的戊二醛溶液，充分搅匀后，放置冷却凝固，再放入0.25mol/L戊二醛溶液中浸泡，于5℃过夜后，再切成3‑5mm3大小的小块，并将其浸泡在0.25mol/L戊二醛溶液中5℃过夜，再取出以蒸馏水洗涤，滤干，得含天冬氨酸酶的固定化大肠杆菌，将其装填到填充式生物反应器中，备用；(3)转化：取保温32℃的1mol/L延胡索酸铵含1mmol/LMgCl2，pH为8.5底物的溶液，以一定的空间速度连续流过生物反应器，控制最大转化率大于95％，得转化液；(4)修饰：取1g右旋糖苷溶于15ml蒸馏水，另取一定量NaIO4溶于10ml热水中，将两溶液混合，于4℃冰箱反应18h，室温下以蒸馏水透析4h后，再以5LpH7.4的0.1mol/L磷酸钠缓冲液透析，将透析后的液体加入到步骤(3)的转化液中，混合充分，得到混合液；(5)制取粗品：向步骤(4)得到的混合液渐加入1mol/L的HCl，调pH至2.8，在保持5℃下放置过夜结晶，滤取结晶，用水洗涤，滤干，于105℃干燥，得L‑天冬氨酸粗品；(6)结晶：将粗品用稀氨水重结晶，先以氨水溶解成pH为5.0，浓度15％的溶液再加入1％活性炭，加热70℃搅拌脱色2h后，趁热过滤去渣，取滤液冷却，保温5℃过夜结晶，过滤取结晶，85℃真空干燥，即得L‑天冬氨酸成品。