[发明专利]基于硼酸荧光探针的分子印迹微球检测糖蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种基于硼酸荧光探针的分子印迹微球检测糖蛋白的方法，该方法以单分散交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球为载体，在其表面接枝硼酸荧光探针，以此硼酸荧光探针为功能单体，以指定糖蛋白为模板分子，模板分子与功能单体与聚合后形成稳定预聚物，再采用表面印迹技术制备成指定糖蛋白分子印迹微球，该分子印迹微球对指定糖蛋白有选择性识别性能，可直接采用荧光法检测糖蛋白，与传统的质谱法或色谱法检测相比，操作更简单、检测速度更快。

主权项

一种基于硼酸荧光探针的分子印迹微球检测糖蛋白的方法，其特征在于它由下述步骤组成：(1)单分散多孔交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球表面键合氨基将单分散多孔交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球在弱酸性条件下水解，得到表面为羟基的单分散交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球，将此微球分散于无水乙醇中，加入氨水与3‑氨丙基三乙氧基硅烷的体积比为1:10～20的混合液，表面为羟基的单分散交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球与3‑氨丙基三乙氧基硅烷的质量‑体积比为1g:20～40mL，超声分散均匀，室温搅拌12小时，得到表面键合氨基的单分散交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球；(2)单分散多孔交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球表面键合硼酸荧光探针将步骤(1)得到的表面键合氨基的单分散多孔交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球分散于无水乙醇中，依次加入2‑(4‑二羟基硼)苯基‑4‑羧基喹啉、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺，表面键合氨基的单分散多孔交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球与2‑(4‑二羟基硼)苯基‑4‑羧基喹啉、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺、N‑羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:0.8～1.2:0.8～1.2:0.4～0.6，超声分散均匀，40℃搅拌5～10小时，得到表面键合硼酸荧光探针的单分散交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球；(3)制备具有荧光特性的指定糖蛋白分子印迹微球将步骤(2)得到的表面键合硼酸荧光探针的单分散交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球和指定糖蛋白加入pH值为7.5的磷酸盐缓冲液中，混合均匀，密封，室温孵育3小时，所得产物与过硫酸铵、苯胺在室温条件下搅拌1～4小时，其中表面键合硼酸荧光探针的单分散交联甲基丙烯酸环氧丙酯微球和指定糖蛋白、过硫酸铵、苯胺的质量比为1:0.005～0.015:0.5～2:1～4，得到具有荧光特性的指定糖蛋白分子印迹微球；(4)荧光法检测待测样品将步骤(3)得到的具有荧光特性的指定糖蛋白分子印迹微球分散于pH值为5.5～9.5的磷酸盐缓冲液中，配制成0.1mg/mL的指定糖蛋白分子印迹微球分散液，向该分散液中加入指定糖蛋白标准样品，用荧光光谱仪测量不同浓度下指定糖蛋白对应体系的荧光强度，绘制荧光强度随指定糖蛋白浓度的对数值变化的标准曲线；按照上述方法用荧光光谱仪测量待测样品的荧光强度，根据待测样品的荧光强度，结合标准曲线的线性方程即可确定待测样品中指定糖蛋白的浓度。