[发明专利]一种蕲蛇酶的生产方法有效
| 申请号： | 201410706763.8 | 申请日： | 2014-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN104357430A | 公开（公告）日： | 2015-02-18 |
| 发明（设计）人： | 万兴平;蒋宗解;陈碧强;李玉洁;宁千年;余成恢 | 申请（专利权）人： | 福建汇天生物药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 福州市鼓楼区博深专利代理事务所(普通合伙) 35214 | 代理人： | 林志峥 |
| 地址： | 365001 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种蕲蛇酶的生产方法，包括以下步骤：(1)将蕲蛇毒冻干粉溶解于过量的0.05mol/L、pH值为8.5的Tris‐HCl缓冲液中；(2)将所述蕲蛇毒溶液上DEAE‐Sepharose Fast Flow阴离子交换柱，进行洗脱分离；(3)将步骤(2)获得的溶液上SOURCE 30Q凝胶柱，进行层析；然后上phenyl sepharose high performance柱层析分离；(4)将步骤(3)获得的溶液上Hiload 26/60Superdex75PG柱，收集具有凝血酶样酶活力的第二个蛋白峰，即为蕲蛇酶溶液。本发明的蕲蛇酶的生产方法制得的蕲蛇酶溶液为单一组分，具有纯度高的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 蕲蛇 生产 方法 | ||
【主权项】：
一种蕲蛇酶的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在温度为4～10℃条件下将蕲蛇毒冻干粉溶解于0.04～0.06mol/L、pH值为8～9的Tris‐HCl缓冲液中，静置60min，0～10℃条件下离心获得上清液，将上清液用0.01mol/L、pH值为8～9的Tris‐HCl缓冲液进行透析，获得蕲蛇毒溶液；(2)将所述蕲蛇毒溶液上DEAE‐Sepharose Fast Flow阴离子交换柱，进行洗脱分离，收集蛋白峰中具有凝血酶样酶活力的蛋白峰，将收集的蛋白峰合并，然后用0.01mol/L、pH值为7～8的Tris‐HCl缓冲液进行透析；(3)将步骤(2)获得的溶液经0.22μm微孔滤膜过滤后，上SOURCE 30Q凝胶柱，进行层析，收集具有凝血酶样酶活力的蛋白峰，将收集的蛋白峰合并后上phenyl sepharose high performance层析柱，将收集的具有凝血酶样酶活力的蛋白溶液先于真空度‐0.08M Pa以下、5～10℃条件下进行浓缩，再用0.01mol/L、pH值为7～8Tris‐HCl缓冲液透析，将透析后的溶液于真空度‐0.08MPa以下、5～10℃条件下进行浓缩；(4)将步骤(3)获得的溶液用0.22μm微孔滤膜进行过滤后上Hiload 26/60Superdex75PG柱，收集具有凝血酶样酶活力的第二个蛋白峰，即为蕲蛇酶溶液。
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