[发明专利]一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变的检测方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变的检测方法及试剂盒及其应用。所述的检测方法包括步骤：提取检测对象的全基因组DNA；采用PCR引物对Ⅰ、PCR引物对Ⅱ、PCR引物对Ⅲ和PCR引物对Ⅳ对得到的全基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；对得到的PCR扩增产物进行分析，判断待检测的样本全基因组DNA中的脊髓性肌萎缩症相关基因的四个位点是否存在突变；所述的试剂盒包括PCR引物对Ⅰ、PCR引物对Ⅱ、PCR引物对Ⅲ和PCR引物对Ⅳ；本发明的检测方法及试剂盒设计巧妙，在节约样本的同时可对三种基因进行检测，且检测快速、准确、简便，从而可作为医师诊断、治疗和用药的参考依据，适于大规模推广应用。

主权项

1.一种脊髓性肌萎缩症相关基因突变的检测方法，所述的方法为非诊断和治疗目的的方法，其特征在于，包括如下进行的步骤：(1)取待检测的样本，提取全基因组DNA；(2)采用PCR引物对Ⅰ、PCR引物对Ⅱ、PCR引物对Ⅲ和PCR引物对Ⅳ对所述步骤(1)中得到的全基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；所述PCR引物对Ⅰ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，所述PCR引物对Ⅱ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示，所述PCR引物对Ⅲ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示，所述PCR引物对Ⅳ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示；所述PCR扩增在两个PCR反应体系中进行，所述PCR引物对Ⅰ和PCR引物对Ⅲ在PCR反应体系Ⅰ中对全基因组DNA进行PCR扩增，所述PCR引物对Ⅱ和PCR引物对Ⅳ在PCR反应体系Ⅱ中对全基因组DNA进行PCR扩增；还包括采用内参引物PCR引物对Ⅴ对所述步骤(1)中得到的全基因组DNA进行PCR扩增；所述PCR引物对Ⅴ在PCR反应体系Ⅱ中对全基因组DNA进行PCR扩增；所述PCR引物对Ⅴ的上游引物和下游引物序列如SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示；(3)对所述步骤(2)中得到的PCR扩增产物进行分析，判断待检测的样本全基因组DNA中的脊髓性肌萎缩症相关基因的四个位点是否存在突变；所述PCR反应体系Ⅰ和PCR反应体系Ⅱ中还包括荧光探针；所述反应体系Ⅰ中包括荧光探针Ⅰ和/或荧光探针Ⅰ’，荧光探针Ⅲ；所述反应体系Ⅱ中包括荧光探针Ⅱ，荧光探针Ⅳ和内参荧光探针Ⅴ；所述荧光探针Ⅰ序列如SEQ ID NO：11所示，所述荧光探针Ⅰ’序列如SEQ ID NO：12所示，所述荧光探针Ⅱ序列如SEQ ID NO：13所示，所述荧光探针Ⅲ序列如SEQ ID NO：14所示，所述荧光探针Ⅳ序列如SEQ ID NO：15所示，所述内参荧光探针Ⅴ序列如SEQ ID NO：16所示。