[发明专利]一种脂肪干细胞的原代分离培养方法有效
| 申请号： | 201410710108.X | 申请日： | 2014-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN104560868B | 公开（公告）日： | 2018-06-05 |
| 发明（设计）人： | 王一飞;陈海佳;葛啸虎;卢瑞珊;马岩岩;王小燕 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 广州圣理华知识产权代理有限公司 44302 | 代理人： | 顿海舟;陈业胜 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种脂肪干细胞的原代分离培养方法，包括以下步骤：1)洗涤脂肪组织；2)在脂肪组织中加入等体积的I型胶原酶和胰蛋白酶的混合液体；3)加入FBS，盖上瓶盖后封口摇匀，离心；离心后弃上清液；4)用含有FBS的DMEM重悬沉淀，沉淀与含有FBS的DMEM的体积比为1:1，吹打均匀后形成细胞悬液；将细胞悬液接种至培养基中；5)把接种后的培养基培养；6)培养后，转移细胞培养箱中继续培养。本发明的所探索的酶解条件稳定、高效，脂肪组织被彻底酶解，各成分细胞被最大化的释放出来；在不影响ADSCs的活性的前提下，单位脂肪体积所获得的ADSCs的量相对稳定。 | ||
| 搜索关键词： | 脂肪组织 脂肪干细胞 原代分离 沉淀 胰蛋白酶 封口 细胞悬液接种 培养基培养 细胞培养箱 混合液体 酶解条件 细胞悬液 培养基 上瓶盖 上清液 体积比 最大化 吹打 酶解 摇匀 重悬 洗涤 接种 脂肪 细胞 释放 探索 | ||
【主权项】：
一种脂肪干细胞的原代分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)获得脂肪组织，清洗；2)在脂肪组织中加入等体积的I型胶原酶和胰蛋白酶的混合液体；其中混合液体中I型胶原酶和胰蛋白酶的质量百分数分别为0.05％～0.3％和0.01％～0.1％，充分混匀后消化30～60min；3)加入FBS，盖上瓶盖后封口摇匀，离心；离心后弃上清液；4)用含有FBS的DMEM重悬细胞沉淀，细胞沉淀与含有FBS的DMEM的体积比为1:1，吹打均匀后形成细胞悬液；将细胞悬液接种至含有FBS的高糖DMEM培养基中；5)把接种后的培养基转移至细胞培养箱中培养；6)培养24～72h后，吸弃皿内培养基，清洗后添加含有EGF和FBS的DMEM，转移细胞培养箱中继续培养；其中，所述步骤4)和6)中的DMEM中的FBS的体积百分数为10％，且所述步骤6)DMEM中的EGF的浓度为10ng/mL。
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