[发明专利]一种高开环率洛伐他汀的生产方法

摘要

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种高开环率洛伐他汀的生产方法，其包括紫色红曲霉诱变和该诱变菌种发酵的工艺，本发明的有益效果是：本发明的诱变菌株及其生产洛伐他汀的方法，与常规红曲霉生产菌株及生产方法相比，其获得的洛伐他汀开环率可提高1.5倍以上，达到68.9%，从而获得品质更高的洛伐他汀产品。

主权项

一种高开环率洛伐他汀的生产方法，包括如下步骤：a、以生理盐水从初始菌株紫色红曲霉生长斜面上将孢子洗下，制得孢子悬液，接种种子培养基，培养35‑40 h，取菌悬液以无菌纱布过滤，以玻璃珠震荡打散至单孢子悬液，收集单孢子悬液备用；将孢子悬液置于10‑16 W紫外灯下，垂直距离25‑30cm，搅拌状态下照射；然后在红光下进行稀释涂布平板，避光培养；取紫外诱变致死率80～90%的诱变菌，富集培养36 h，取菌悬液以无菌纱布过滤，以玻璃珠震荡打散至单孢子悬液；取孢子悬液均匀涂布咋菌平板上，置于超净台内无菌风吹干制成菌膜进行氦离子束注入；选择注入能量为5～25keV，束流强度为15mA，注入剂量为7. 8×1014 ions /cm2 ～ 3. 9×1015 ions /cm2，注入靶室的真空度为10‑3 Pa，采用脉冲注入，每个脉冲5s，间隔为50s，注入完成后平皿以lmL 无菌水洗下孢子；经过诱变处理后的孢子稀释至适当浓度后涂布PDA固体平板，26～32℃培养3～4 d；将长出的单菌落利用打孔器转接到固体PDA平板的一侧，26～32℃培养4～5 d后，利用打孔器在平板另一侧转接构巢曲霉，26～32℃下进行对峙培养7～8 d；b、选取构巢曲霉菌落直径为3.0‑5.0cm的红曲霉菌株从平板上刮取并转接到种子培养基中，26‑32℃培养3‑4 d；按照15%的接种量，将长好的种子培养基转接到发酵培养基中，26‑32℃摇床120‑180 r/m培养3 ‑4d后，20‑25℃摇床120‑180 r/m培养18‑25d。