[发明专利]一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法有效
| 申请号： | 201410718290.3 | 申请日： | 2015-08-03 |
| 公开（公告）号： | CN104498442A | 公开（公告）日： | 2015-07-29 |
| 发明（设计）人： | 蒋伟;阳小飞;李小红 | 申请（专利权）人： | 中南民族大学 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 武汉华旭知识产权事务所 42214 | 代理人： | 刘荣;周宗贵 |
| 地址： | 430074 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法，包括如下步骤：取Tris-HCl溶液、NaCl溶液、EDTA溶液进行混合，得到TNE buffer病毒浓缩液；取蔗糖固体用TNE buffer病毒浓缩液溶解，得到病毒提取液；将病毒提取液与慢病毒上清液的混合溶液放入离心机中，在相对离心力1000g～10000g，4℃的条件下离心；去除上清液，随后中加入PBS，得到慢病毒溶液，将慢病毒溶液放入冰箱中4℃条件下静置，上清液即为高滴度慢病毒产品；该方法不需要超高速离心，使用常规离心力即可制备高滴度慢病毒产品，慢病毒产品制备成本低，该方法操作简单，可以广泛用于大部分实验室。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 常规 离心 制备 高滴度慢 病毒 产品 方法 | ||
【主权项】：
一种常规离心制备高滴度慢病毒产品的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备TNE buffer病毒浓缩液：取pH为7.0～7.6的Tris‑HCl溶液，NaCl溶液和EDTA溶液进行混合，得到TNE buffer病毒浓缩液，TNE buffer病毒浓缩液中，Tris‑HCl浓度为30～70mmol/L，NaCl浓度为80～120mmol/L，EDTA浓度为0.3～0.7mmol/L；(2)制备病毒提取液：将蔗糖固体用TNE buffer病毒浓缩液溶解，得到病毒提取液，病毒提取液中蔗糖的质量体积浓度为0.05～0.5g/mL；(3)离心：取慢病毒上清液和病毒提取液放入离心管中，静置形成分层，将装有病毒提取液和慢病毒上清液的离心管放入离心机中，在相对离心力1000g～10000g，2～6℃的条件下离心1～4小时；所述病毒提取液与慢病毒上清液的体积比为1：3～1：5；(4)制备慢病毒产品：按慢病毒上清液：PBS＝500：1～50：1的体积比量取PBS备用，去除离心后的离心管中溶液的上清液，随后向离心管中加入PBS，得到慢病毒溶液，保持慢病毒溶液的液面平稳，将慢病毒溶液放入冰箱中，2～6℃条件下静置8～24小时，将静置后的慢病毒溶液的上清液分离取出，上清液即为高滴度慢病毒产品。
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