[发明专利]小菜蛾对钠离子通道阻断剂靶标抗性的分子检测方法

摘要

本发明公开了小菜蛾对钠离子通道阻断剂靶标抗性的分子检测方法。该方法利用SEQ ID NO.1所示的特异性正向引物F和SEQ ID NO.2所示的特异性反向引物R对小菜蛾基因组DNA模板进行PCR扩增，对PCR纯化产物直接测序，根据测序色谱图鉴定小菜蛾个体钠离子通道在编码1845和1848位氨基酸的核苷酸是否突变及其具体类型，一次性区分出所述钠离子通道阻断剂抗性靶标的敏感纯合子、抗性杂合子和抗性纯合子。该方法具有快速简便、准确性高的优点，专用于小菜蛾对钠离子通道阻断剂(茚虫威和氰氟虫腙)抗性的监测和预警。

主权项

1.一种小菜蛾对钠离子通道阻断剂抗性靶标的分子检测方法，所述的钠离子通道阻断剂为茚虫威和氰氟虫腙，其特征在于利用SEQ ID NO.1所示的特异性正向引物F和SEQ ID NO.2所示的特异性反向引物R对小菜蛾基因组DNA模板进行PCR扩增，对PCR纯化产物直接测序，根据测序色谱图鉴定小菜蛾个体钠离子通道编码1845和1848位氨基酸的核苷酸是否突变及其具体类型，一次性区分出所述钠离子通道阻断剂抗性靶标的敏感纯合子、抗性杂合子和抗性纯合子；所述的根据测序色谱图鉴定小菜蛾个体钠离子通道编码1845和1848位氨基酸的密码子是否突变及其具体类型，一次性区分出所述钠离子通道阻断剂抗性靶标的敏感纯合子、抗性杂合子和抗性纯合子为：色谱图中识别序列前一位为T单峰、识别序列后一位为G单峰，则表明该小菜蛾个体为不携带钠离子通道1845和1848位氨基酸突变的钠离子通道阻断剂敏感纯合子；色谱图中识别序列前一位为T/A双峰、识别序列后一位为G单峰，则表明该小菜蛾个体为携带1845位氨基酸由F突变为Y的钠离子通道阻断剂抗性杂合子；色谱图中识别序列前一位为A单峰、识别序列后一位为G单峰，则表明该小菜蛾个体为携带1845位氨基酸由F突变为Y的钠离子通道阻断剂抗性纯合子；色谱图中识别序列前一位为T单峰、识别序列后一位为G/A双峰，则表明该小菜蛾个体为携带1848位氨基酸由V突变为I的钠离子通道阻断剂抗性杂合子；色谱图中识别序列前一位为T单峰、识别序列后一位为A单峰，则表明该小菜蛾个体为携带1848位氨基酸由V突变为I的钠离子通道阻断剂抗性纯合子；色谱图中识别序列前一位为T/A双峰、识别序列后一位为G/A双峰，则表明该小菜蛾个体为同时携带1845位氨基酸由F突变为Y和 1848位氨基酸由V突变为I双突变的钠离子通道阻断剂抗性杂合子；色谱图中识别序列前一位为A单峰、识别序列后一位为A单峰，则表明该小菜蛾个体为同时携带1845位氨基酸由F突变为Y和 1848位氨基酸由V突变为I双突变的钠离子通道阻断剂抗性纯合子；其中，所述的识别序列为5′‑CCTCATC‑3′。