[发明专利]一种p53蛋白的电子介体型酶促电化学免疫检测方法

摘要

本发明是一种p53蛋白的电子介体型酶促电化学免疫检测方法，具体步骤包括：免疫分子固定化活性界面制备；电子介体型酶促电化学免疫分析系统构建与优化；p53蛋白定量检测。经静电纺丝、电聚合硫堇获得PA6-MWCNTs-PTH免疫分子固定化活性界面，在PA6-MWCNTs-PTH界面上经三明治免疫反应构建电子介体型酶促电化学免疫分析系统并进行相关参数优化，应用所构建的免疫分析系统定量检测p53蛋白。本发明所提供的检测方法具有高灵敏度、高选择性、高稳定性、可再生、宽线性范围及低检出限等特点。

主权项

一种p53蛋白的电子介体型酶促电化学免疫检测方法，其特征在于所述的检测方法按以下步骤进行：(1)制备免疫分子固定化活性界面：以尼龙6与羧基化多壁碳纳米管为原料经静电纺丝、电聚合硫堇得到聚硫堇功能化的复合纳米纤维PA6‑MWCNTs‑PTH修饰电极；(2)构建电子介体型酶促电化学免疫分析系统：将步骤(1)所得的PA6‑MWCNTs‑PTH修饰电极与捕获抗体Ab₁温育，电极经PBS溶液清洗，除去电极表面非特异性吸附的Ab₁，然后浸入含巯基乙醇的牛血清蛋白中放置，以封被电极表面未被捕获抗体覆盖的活性位点，得到捕获抗体修饰电极；将所述的捕获抗体修饰电极与检测肿瘤蛋白p53温育，电极经PBS溶液清洗，得到检测肿瘤蛋白p53电极；将所述的检测肿瘤蛋白p53电极与HRP标记的检测抗体HRP@Ab₂温育，电极经PBS溶液清洗，获得三明治Ab₁‑AG_p53‑HRP@Ab₂复合物修饰电极；将所述三明治Ab₁‑AG_p53‑HRP@Ab₂复合物修饰电极作为工作电极，Ag/AgCl或饱和KCl电极作为参比电极，Pt丝电极作为对电极，构成三电极体系，经所述三电极体系构建电子介体型酶促电化学免疫分析系统；(3)p53蛋白定量检测：采用步骤(2)得到的分析系统，结合标准曲线对p53蛋白进行定量检测；所述标准曲线是以系列p53蛋白标准溶液的浓度为横坐标，差分脉冲伏安法差值为纵坐标绘制标准曲线；其中DPV强度差值是p53蛋白的DPV强度减去空白液的DPV强度。