[发明专利]一种高效海因酶表达菌固载化的方法

摘要

本发明实施例提供了一种高效海因酶表达菌固载化的方法，涉及生产抗生素中间体的技术领域，可以加强细胞的各方面稳定性，同时能维持细胞中酶的活力而且使得高效海因酶表达菌的利用率显著提高。所述方法包括：培养高效海因酶表达菌，然后每15mL质量分数为2.8-3.0％的海藻酸钠溶液中加入90-100mg培养的高效海因酶表达菌；形成细胞/海藻酸钠悬浮液，用注射器在装满质量分数为3％-4％的CaCl₂溶液的平皿中缓慢滴入该悬浮液，形成直径为2.8-3mm的凝胶小球；置于4℃温度下固载化60-65min，使其固载硬化，滤去液体，得球状颗粒，即获得固载化的高效海因酶表达菌细胞。

主权项

一种高效海因酶表达菌固载化的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、培养高效海因酶表达菌；将在3.5‑4℃中保存的高效海因酶表达菌于固体LB平板划线，37‑38℃温度下过夜培养，第二天挑取单个菌落接种于95‑100mL含磷酸盐缓冲液的LB培养液中，37‑38℃温度下振荡培养至OD6000.6‑0.8时，再以0.5‑0.55％的接种量接种到三角瓶中，37‑38℃温度下扩大培养11‑12h，加入2‑2.5％的对羟基苯海因并加入促溶剂二甲基亚砜DMSO，再在37‑38℃温度下继续培养16‑18h后，4950‑5000r/min离心9‑10min，并用中性pH7.0‑7.2的灭菌蒸馏水洗涤菌体，收集菌体；S2、制备固载化的高效海因酶表达菌细胞；取海藻酸钠加热溶于水中配成质量分数为2.8‑3.0％的海藻酸钠溶液，灭菌；每15mL所述海藻酸钠溶液中加入90‑100mg步骤S1培养的高效海因酶表达菌，形成细胞/海藻酸钠悬浮液；用注射器在装满CaCl₂溶液的平皿中缓慢滴入该悬浮液，形成直径为2.8‑3mm的凝胶小球；置于4℃温度下固载化60‑65min，使其固载硬化，滤去液体，得球状颗粒，即获得固载化的高效海因酶表达菌细胞，所述CaCl₂溶液的质量分数为：3.0％‑4.0％。