[发明专利]一种牛角瓜组织培养的方法

摘要

本发明涉及一种牛角瓜组织培养的方法，属植物组织培养领域，包括如下步骤：培养基配制、外植体选取与消毒、种子萌发、不定芽诱导及增殖、生根诱导、组培苗驯化及移栽。基本培养基为MS培养基，蔗糖25～30g/L，琼脂粉8～9g/L，PVP 0.1～0.5g/L，培养基pH为5.6～5.8；种子萌发培养基为MS或1/2MS；不定芽诱导培养基为MS+6-BA3.0～5.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；不定芽增殖培养基为MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP0.1～0.5g/L或1/2MS+IBA0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L。培养条件为25±2℃，12～16h/d，40～60μ·mol·m^-2·s^-1。本发明的优点：建立的牛角瓜组培快繁技术体系种苗繁殖速度快，健壮均匀，变异少，移栽成活率高，适合优良牛角瓜品种种苗规模化生产。

主权项

一种牛角瓜组织培养的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)、外植体的选取及处理：选取牛角瓜种子作为起始材料，从牛角瓜果实中将种子取出，去除种子表面纤维之后经过浸种2h后，选择沉在容器底部的种子作为组培用外植体；2)、种子萌发：在超净工作台上，将经过表面消毒的牛角瓜种子转移至无菌接种盘中，用无菌滤纸吸去外植体表面水分，接种于种子萌发培养基MS或1/2MS培养基中进行种子萌发，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m^‑2·s^‑1；3)不定芽诱导：在无菌工作台上，由种子萌发获得的无菌苗从腋芽下方每两个芽为一个单位切段，带芽茎段接种于不定芽诱导培养基进行不定芽的诱导，不定芽诱导培养基为MS+6‑BA 3.0～5.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L中，进行不定芽的诱导，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m^‑2·s^‑1；4)不定芽增殖：在无菌工作台上，将诱导获得的1～2cm高的丛生不定芽从基部以2～3个连在一起的不定芽为一个接种单元分离，将分离材料接种于不定芽增殖培养基中增殖，不定芽增殖培养基为MS+6‑BA 1.0～3.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m^‑2·s^‑1；5)、不定芽生根诱导：将高生长到3～4cm的丛生不定芽从基部单个分离，接入生根培养基中进行不定根的诱导,生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L或1/2MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m^‑2·s^‑1；6)、组培苗驯化及移栽：丛生不定芽基部长出4～6条2～3cm的不定根后，将生根苗移至温室，散射光培养3～5d后再打开瓶盖培养1～2d，将牛角瓜组培苗小心从培养瓶中连根取出，用自来水洗净组培苗表面的培养基,然后在通风阴凉处稍晾干组培苗表面水分后将牛角瓜组培苗，栽入基质中，保湿90％以上培养15d，然后在温室中正常培养；种子萌发、不定芽诱导及增殖、不定芽生根诱导基本培养基均为MS培养基，蔗糖用量为25～40g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8～9g/L，PVP用量为0.1～0.5g/L，培养基pH分装前调整为5.6～5.8；种子萌发培养基为MS或1/2MS培养基；不定芽诱导培养基为MS+6‑BA 3.0～5.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；不定芽增殖培养基为MS+6‑BA 1.0～3.0mg/L+NAA 0.05～0.2mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；生根培养基为MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L或1/2MS+IBA 0.01～0.5mg/L+PVP 0.1～0.5g/L；种子萌发、不定芽诱导及增殖、不定芽生根培养条件为，培养温度25±2℃，光照时间为12～16h/d，光照强度为40～60μ·mol·m^‑2·s^‑1。