[发明专利]一种中温α-淀粉酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种中温α-淀粉酶的制备方法，属于酶制剂制备技术领域。以通过氯化锂-硫酸二乙酯复合诱变获得的枯草芽孢杆菌304Bacillus subtilis304，经菌种活化、液体种子培养、发酵罐培养等步骤制备而成，制备的中温α-淀粉酶酶活力高达7000-9600U/ml；最适作用温度为65℃，该酶在65℃条件下保存24h仍具有80-83％酶活，70℃条件下保存12h仍具有50-60％以上酶活；该酶最适反应pH值为5.0，在pH4-6下保存18h后仍有80％以上的酶活，比现有的中温α-淀粉酶酶活力更高，酶作用最适pH值范围更宽泛，耐温度更高，特别适合反应温度高、液化工艺与糖化工艺并存的工业化需求。

主权项

一种中温α‑淀粉酶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：枯草芽孢杆菌经斜面菌种活化和三级摇瓶种子培养及一级种子罐培养获得液体种子；将液体种子以以4‑6％接种量接入发酵罐，培养温度30‑37℃，搅拌速度200‑250r/min，通风量(V/V)1:1‑3,培养时间10‑15h；然后以1.5‑2℃/h降温速率缓慢降温至10‑15℃，恒温培养10‑15h；继续以1.5‑2℃/h降温速率缓慢降温至2‑5℃，此时，将一级种子罐发酵液以2‑4％接种量追加接入发酵罐，恒温培养10‑15h；最后以1.5‑2℃/h升温速率缓慢升至30‑37℃，恒温培养20‑40h；溶解氧控制：通过调整搅拌转速及通风量，控制溶解氧15‑30％；pH控制：通过补氨水或稀磷酸，控制发酵过程中pH值保持在5.5‑6.5；发酵液经过滤、浓缩、调配、精滤、干燥得中温α‑淀粉酶。