[发明专利]一种利用重组Corynebacterium crenatum全细胞转化AD生成ADD的方法有效
| 申请号： | 201410748156.8 | 申请日： | 2014-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN104531746B | 公开（公告）日： | 2019-09-03 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;许正宏;吴丹;邵明龙;张显;徐美娟;杨套伟 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/77 | 分类号： | C12N15/77;C12N1/21;C12P33/02;C12R1/15 |
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| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种利用重组Corynebacterium crenatum全细胞转化AD生成ADD的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得新金色分枝杆菌中3‑甾酮‑△1‑脱氢酶(KSDD)的基因扩增，然后利用pXMJ19质粒，实现了该基因在模式菌株钝齿棒杆菌SYPA5‑5中的过量表达,首次成功的纯化出有活性的来源于金色分枝杆菌中的KSDD酶，并首次对其酶学性质进行了研究。本发明构建以4‑AD为底物全细胞转化为方法的高产ADD的枯草芽孢杆菌工程菌株，对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现3‑甾酮‑△1‑脱氢酶的活力较出发菌株有了明显提高，以1％(w/v)4‑AD为底物，全细胞转化12h，底物摩尔转化率达到83.87％,是出发菌株相对转化率的23倍。 | ||
| 搜索关键词： | 全细胞 底物 金色分枝杆菌 出发菌株 脱氢酶 转化 甾酮 枯草芽孢杆菌 钝齿棒杆菌 摩尔转化率 发酵性能 工程菌株 过量表达 基因工程 基因扩增 酶学性质 模式菌株 酶工程 酶活力 构建 菌株 质粒 高产 基因 研究 成功 发现 | ||
【主权项】：
1.一种重组钝齿棒杆菌，其特征是：通过PCR技术获得来源于新金色分枝杆菌的KSDD编码基因ksdD，将其与表达载体pXMJ19连接获得重组表达载体pXMJ19‑ksdD，将所述重组载体pXMJ19‑ksd D用化学转化法转化至菌株Corynebacterium crenatum SYPA5‑5中；所述重组钝齿棒杆菌全细胞转化4‑AD产ADD的方法包括：将该菌株以1％接种量接种于50mL LBG培养基中，培养24h，离心回收菌体，洗涤两次，用50mM的Tris‑HCl pH7.0缓冲液复溶，加入1％(w/v)4‑AD和3％(v/v)β‑环糊精继续在30℃，160rpm培养12h。
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