[发明专利]一种脯-酪环二肽促进荧光假单胞菌类胡萝卜素合成的方法及其应用在审
申请号: | 201410755775.X | 申请日: | 2014-12-10 |
公开(公告)号: | CN104404117A | 公开(公告)日: | 2015-03-11 |
发明(设计)人: | 张亚南;李丹;李嫣 | 申请(专利权)人: | 青岛大学 |
主分类号: | C12P23/00 | 分类号: | C12P23/00;C12R1/39 |
代理公司: | 青岛高晓专利事务所 37104 | 代理人: | 隋臻玮 |
地址: | 266071 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明涉及一种利用脯-酪环二肽促进荧光假单胞菌类胡萝卜素合成的方法。首先将荧光假单胞菌GcM5-1A活化培养,向培养基中加入配好的脯-酪环二肽溶液,使脯-酪环二肽的终浓度达到0.5-10μg/mL,继续振荡培养12小时后,离心收集菌体,菌体经真空干燥后,用丙酮与甲醇混合液超声破碎,提取荧光假单胞菌中的类胡萝卜素;用分光光度计测定类胡萝卜素浸提液的吸光值,计算类胡萝卜素的含量。本发明方法能明显提高荧光假单胞菌GcM5-1A中的类胡萝卜素的含量,在通过代谢调控提高荧光假单胞菌制备类胡萝卜素产量方面有良好的应用前景,也为其他微生物发酵生产类胡萝卜素的研究提供技术参考。 | ||
搜索关键词: | 一种 二肽 促进 荧光 假单胞 菌类 胡萝卜素 合成 方法 及其 应用 | ||
【主权项】:
一种利用脯‑酪环二肽促进荧光假单胞菌类胡萝卜素合成的方法,其特征在于按照如下步骤操作:第一步,荧光假单胞菌GcM5‑1A的菌种活化及培养,取斜面保存的荧光假单胞菌划线接种于LB固体培养基上,30℃培养24小时,挑取单菌落接种于LB液体培养基中,30℃、170r/min振荡培养24小时;第二步,荧光假单胞菌生长曲线及类胡萝卜素含量的测定,在无菌操作台上挑取50‑80μL菌悬液转接于100mL的LB液体培养基中,30℃、170r/min振荡培养,每隔2小时取出10‑20mL菌液测量其在600nm和484nm波长下的吸光值;培养6小时后,向培养基中加入预先配好的脯‑酪环二肽溶液,使脯‑酪环二肽的终浓度达到0.5‑10μg/mL,并做好标记,继续振荡培养,同时每隔2小时取10‑20mL菌液测量600nm和484nm的吸光值;绘制出荧光假单胞菌的生长曲线和类胡萝卜素含量曲线;采用振荡培养12小时的菌液来收集提取类胡萝卜素;第三步,类胡萝卜素的提取和测定,将扩大培养所得的菌悬液在4℃条件下离心收集菌体,将收集到的菌体转入小烧杯称重,得到菌体湿重;将称重后的盛有湿菌体的小烧杯放入真空干燥箱除湿,当小烧杯内的菌体的重量不再减少时,称其重量,减去烧杯重量即菌体的干重;计算干重与湿重之间的比例系数,此系数用于计算实验所得菌体的干重;最后,将菌体用20mL的体积比为4:1的丙酮与甲醇混合液重悬,低温超声破碎细胞,得到含有菌体碎片的菌悬液;用体积比4:1丙酮与甲醇混合液抽提;将超声波破碎所得含有细胞碎片的菌悬液用小漏斗过滤,再用丙酮与甲醇混合液定容至25mL,得到类胡萝卜素的浸提液,用分光光度计测定类胡萝卜素浸提液的吸光值,计算类胡萝卜素的含量。
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