[发明专利]一种N端替换提高米曲霉木聚糖酶(AoXyn11A)热稳定性的方法有效
| 申请号： | 201410757519.4 | 申请日： | 2014-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN104388412B | 公开（公告）日： | 2017-10-31 |
| 发明（设计）人： | 邬敏辰;何瑶;殷欣;李剑芳;姚瑶;吴芹 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12N15/56;C12N15/81;C12R1/69 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种N端替换提高米曲霉木聚糖酶热稳定性的方法。基于高性能计算机及其相关生物学软件对Aspergillus oryzae常温木聚糖酶AoXyn11A耐热性改造的理性设计，将AoXyn11A N端41个氨基酸替换成同一家族耐热木聚糖酶TfGH11 N端42个氨基酸，获得了一种耐热杂合木聚糖酶ATX11A，其氨基酸序列为SEQ ID NO1。该杂合酶基因ATx11A是采用大引物PCR技术由AoXyn11A和TfGH11基因的相应片段拼接而成的，其核苷酸序列为SEQ ID NO2。将重组毕赤酵母GS115/ATx11A在30℃诱导72 h，期间每隔24 h添加1.0％(v/v)甲醇。表达的耐热杂合酶ATX11A的最适温度由AoXyn11A的50℃提高至65℃；在60℃处理1 h，ATX11A的半衰期由AoXyn11A的1.3 min延长至55 min。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 替换 提高 曲霉 聚糖 aoxyn11a 热稳定性 方法 | ||
【主权项】：
一种耐热杂合木聚糖酶ATX11A，其特征是将来源于米曲霉(Aspergillus oryzae)CICC40186的糖苷水解酶11家族常温木聚糖酶AoXyn11A N端41个氨基酸替换成同一家族耐热木聚糖酶TfGH11(PDB:3ZSE)N端42个氨基酸，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。
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