[发明专利]一种提取和测定花生脂肪酸的简便方法

摘要

本发明公开了一种提取和测定花生脂肪酸的简便方法，包括以下步骤：新鲜的样品经冷冻干燥获得干组织；称取干样品，放入研钵中，液氮研磨粉碎；或者将干样品放入钳口顶空瓶中，采用玻璃棒碾碎；加入试剂I和II，超声混匀，然后加入试剂III，或再加入内标物，进行水浴反应；反应完成冷却后，加入有机试剂和盐溶液，混匀，将溶液吸出转入离心管中，静置；离心分离，吸取上清液，用于上机测定；采用归一化法或内标法计算脂肪酸组分的含量。本发明简化了样品前处理过程，操作简便、快捷，极大的缩短了试验时间，成本低，需要的样品量少，具有很好的通用性，是一种实验室中简便、准确的花生脂肪酸提取和测定方法。

主权项

1.一种提取和测定花生脂肪酸的简便方法，包括以下步骤：（1）新鲜的样品经冷冻干燥获得干组织；（2）称取干样品，放入研钵中，液氮研磨粉碎；或者将干样品放入钳口顶空瓶中，采用玻璃棒碾碎；（3）向钳口顶空瓶中加入试剂I和II浸泡样品，超声混匀；然后加入试剂III，或再加入内标物储备液，进行水浴反应；（4）反应完成冷却后，加入有机试剂和盐溶液，混匀，将溶液吸出转入离心管中，静置；（5）离心，吸取上清液，用滤膜过滤后转入进样瓶中，用于GC‑MS上机测定；（6）采用归一化法或内标法计算脂肪酸组分的含量；步骤（1）所述的样品是新鲜的花生根、茎、叶、花或者种子；取新鲜的花生根、茎、叶或花，用灭菌的蒸馏水清洗3 次，经冷冻干燥后获得干组织；取新鲜的花生种子，清洗后采用液氮反复研磨，然后再把研碎的种子冷冻干燥；步骤（2）中采用万用天平称取的干样品量为0.01g；所用的钳口顶空瓶大小为5 ml；步骤（3）所述的试剂I为甲醇，加入体积为850μl；试剂II为盐酸，加入体积为100μl；超声波辅助提取的条件为超声波功率300w，超声波频率28kHz，超声时间为10min；试剂III为2,2‑二甲氧丙烷，加入体积为50μl；内标物储备液为1mg/ml的十九碳酸；用压盖器将顶空瓶用带聚四氟乙烯垫的铝盖封好，水浴反应的温度为85℃，反应时间为1h；甲酯化过程中每隔10min振荡一次；步骤（4）所述的有机试剂为正己烷，加入体积为0.5ml；盐溶液为氯化钠溶液，浓度为1%，加入体积为1ml；静置的时间为10 min。