[发明专利]传染性法式囊卵黄免疫球蛋白优化提取工艺

摘要

本发明公开了一种传染性法式囊卵黄免疫球蛋白优化提取工艺，包括如下步骤，第1步是获取高免卵黄抗体：首先用多个免疫剂量的鸡法氏囊油乳剂灭活苗皮下注射获取基础免疫，其次加强免疫，然后再强化免疫并维持。第2步是提取卵黄液。第3步是卵黄免疫球蛋白去脂分层。第4步是提取卵黄抗体。本发明中将蛋鸡经多次免疫后，抗体水平提高。鸡蛋传染性法氏囊抗体水平效价达到 10lg2 以上，试验结果显示免疫后抗体水平1-5天上升较慢，在免疫后的10-15天抗体水平上升较快。

主权项

一种传染性法式囊卵黄免疫球蛋白优化提取工艺，其特征在于，包括如下步骤：第1步，获取高免卵黄抗体：  （1）基础免疫，用多个免疫剂量的鸡法氏囊油乳剂灭活苗皮下注射；  （2）加强免疫，在基础免疫后l0天，以1BD弱毒苗用同样剂量和方法进行再次接种，同时皮下接种1BD油乳剂灭活苗，lml／只；  （3）强化免疫，在加强免疫后l0天，用IBD油乳剂灭活苗再次进行皮下接种，各2ml／只；  （4）维持免疫在强化免疫后10天，根据抗体效价，每1～1.5个月再次加强免疫1次；从第3次免疫后10天开始定期分别用琼脂扩散试验，检测IBD抗体效价, IBD抗体效价为1:256合格，合格后后即可收集高免蛋制备二联高免卵黄抗体液；第2步，提取卵黄液：免疫前鸡所产的蛋作为阴性对照；首次免疫后开始每日收集鸡蛋并编号，4℃保存；取收集的高免蛋用清水擦拭,清除蛋壳上的污物，用0.1%新洁尔灭溶液浸泡消毒，取出晾干后，在无菌条件下用蛋黄分离器分离蛋清和蛋黄，留取蛋黄用灭菌蒸馏水反复冲洗蛋黄表面，用滤纸吸取表面多余的水分，用针头刺破蛋黄膜，分离出卵黄，放置于干净容器中；第3步，卵黄免疫球蛋白去脂分层；第4步，提取卵黄抗体：调整卵黄抗体溶液pH7.4，依据粗提物中蛋白组分在不同浓度盐溶液中的溶解度不同，进行分级沉淀，得到纯度较高的IgY。