[发明专利]一种诊断猪病毒性腹泻的蛋白芯片

摘要

本发明涉及一种诊断猪病毒性腹泻的蛋白芯片。通过合成针对三种病毒膜蛋白胞外表位的多肽，进行免疫母鸡，每一种病毒都筛选出一对IgY抗体；制备固相支持物，待与每种病毒一对抗体中其中一个IgY抗体孵育后，IgY抗体会结合在固相支持物上，当结合有IgY的固相支持物与待检样品反应，样品中的大部分病毒颗粒被特异性的结合；加入一对抗体中的另外一个IgY抗体，加入碱性磷酸酶标记的二抗，洗涤、分离后加入底物AMPPD，AMPPD生产中介体AMPD；AMPD从高能激发状态回到低能量的稳定态，同时发射光子；通过光量子阅读系统记录发光强度，并从标准曲线上计算出待测样品中病毒颗粒的数量。

主权项

一种诊断猪病毒性腹泻的蛋白芯片，其特征在于，包括如下程序：通过合成针对三种病毒PDEV/TGEV/PRV膜蛋白胞外表位的多肽，进行免疫母鸡，每一种病毒都筛选出一对IgY抗体；然后制备固相支持物，将琼脂糖铺在玻片上，进行环氧化和羧基化处理，让琼脂糖连接羧基，再与2‑巯基乙醇反应，获得只结合IgY的固相支持物，待与每种病毒一对抗体中其中一个IgY抗体孵育后，IgY抗体会结合在所述固相支持物上，当结合有IgY的固相支持物与待检样品反应，样品中的大部分病毒颗粒被特异性的结合；加入一对抗体中的另外一个IgY抗体，加入碱性磷酸酶标记的二抗，经温育后形成固相包被抗体‑抗原‑抗体‑酶标记二抗复合物；洗涤、分离后加入底物AMPPD作为化学发光剂，AMPPD在碱性磷酸酶的催化作用下，迅速去磷酸，生产中介体AMPD；AMPD很快分解，从高能激发状态，回到低能量的稳定态，同时发射光子；通过光量子阅读系统记录发光强度，并从标准曲线上计算出待测样品中病毒颗粒的数量。