[发明专利]一种Nisin的提取方法

摘要

本发明涉及一种Nisin的提取方法，它包括Nisin A和Nisin Z。步骤主要包括浓缩上清液、DEAE-Sepharose FF柱层析、Sephacry1S-200HR柱层析、反相HPLC分离技术。本发明中提取的Nisin A和Nisin Z纯度高、回收率高。能有效抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门杆菌。

主权项

一种Nisin的提取方法，其特征是，所述Nisin的提取步骤为：(1)将Lactococus Lactis Subsp.Laclis接种到MRS肉汤培养基中，37℃摇瓶培养(200r/min)48h后，常温4000r/min离心30min，弃沉淀，上清液经Mini_Pellicon切向流超滤系统超滤浓缩后6000r/min离心取上清液，即得到粗提液；(2)DEAE‑Sepharose FF柱层析：将粗提液用A缓冲液(20mmol/L pH6.8磷酸盐缓冲液)充分透析，8000r/min离心取上清液，过A缓冲液平衡的DEAE‑Sepharose FF阴离子交换柱，用含1.00mol/L(NH4)₂SO₄的A缓冲液进行线性梯度洗脱，并将收集的活性洗脱液经Stirred Cells 8050超滤杯浓缩后，用含1.00mol/L(NH4)₂SO₄的A缓冲液充分透析；(3)SOURCE 15PHE柱层析：将阴离子柱收集的活性组份上A缓冲液预平衡过的SOURCE 15PHE柱，A缓冲液淋洗至基线，再用含1.00mol/L(NH4)₂SO₄的A缓冲液进行线性梯度洗脱，最后用蒸馏水洗脱得到3个活性峰，收集合并后浓缩；(4)Sephacry1S‑200HR柱层析：浓缩后的样品过含0.50mol/L(NH4)₂SO₄的A缓冲液预平衡的分子筛Sephacry1S‑200HR柱，然后以同样的缓冲液洗脱，得到两个洗脱峰，收集活性峰样品浓缩，再经Milli‑Q水充分透析；(5)反相HPLC分离：100％乙腈(0.1％TFA)平衡C18柱，将经分子筛后收集的活性组份上柱，用80％乙腈(0.1％TFA)进行线性梯度洗脱，收集到若干分子量在分子质量约为3500u的小肽，冷冻干燥后得到白色粉末状的固体。