[发明专利]预防贾第虫病的二价DNA疫苗及其肠溶制剂

摘要

本发明公开了一种用于预防人或动物贾第虫病的二价DNA疫苗，其中将贾第虫的两种抗原基因α1‑giardin和CWP‑2分别插入真核载体pVAX1中获得重组质粒pVAX1‑α1‑giardin和pVAX1‑CWP‑2，将所述重组质粒pVAX1‑α1‑giardin和pVAX1‑CWP‑2分别转运进入宿主菌中得到分别包含重组质粒pVAX1‑α1‑giardin和重组质粒pVAX1‑CWP‑2的重组菌，所述重组菌构成本发明的二价DNA疫苗。本发明创造性地提出分别针对滋养体和包囊两个阶段联合应用的抗贾第虫病二价DNA疫苗，实现了抑制滋养体的形成从而阻断致病以及抑制包囊的形成从而切断传播，克服了以往疫苗研发中疫苗作用单一的缺点。本发明的二价DNA疫苗本发明还实现了稳定性传代和保护性的持续。本发明还公开了一种定量包含所述二价DNA疫苗的肠溶制剂及其制备方法。

主权项

一种用于预防人或动物贾第虫病的二价DNA疫苗，其特征在于，将贾第虫的两种抗原基因α1‑giardin和CWP‑2分别插入真核载体pVAX1中获得重组质粒pVAX1‑α1‑giardin和pVAX1‑CWP‑2，将所述重组质粒pVAX1‑α1‑giardin和pVAX1‑CWP‑2分别转运进入宿主菌中得到分别包含重组质粒pVAX1‑α1‑giardin和重组质粒pVAX1‑CWP‑2的重组菌，所述重组菌构成所述二价DNA疫苗，其中所述抗原基因α1‑giardin为SEQ ID NO：1序列，所述抗原基因CWP‑2为SEQ ID NO：3序列；所述二价DNA疫苗通过以下步骤制备：(1)以贾第虫的cDNA作为模板，分别通过聚合酶链反应扩增获得α1‑giardin和CWP‑2基因片段；(2)将所述基因片段插入载体pVAX1的HindIII和BamHI位点之间，产生pVAX1‑α1‑giardin和pVAX1‑CWP‑2重组质粒；(3)将步骤2中的重组质粒pVAX1‑α1‑giardin和pVAX1‑CWP‑2分别转运进入宿主菌中，得到分别包含重组质粒pVAX1‑α1‑giardin和重组质粒pVAX1‑CWP‑2的重组菌，两种重组菌等比例混合后，即得到所述二价DNA疫苗；其中，聚合酶链反应扩增中使用的引物如下：α1‑giardin的引物：α1‑G‑F1:CC AAGCTT ATGCCGAAGGTCACCGACAT，其为SEQ ID NO：5序列；α1‑G‑R2:CG GGATCC CTTCACGCGCCAGAGGGTGC，其为SEQ ID NO：6序列；CWP‑2的引物：Gl‑CWP2‑F5:CC AAGCTT AGGCAGACAGTAGTCCGC，其为SEQ ID NO：7序列；Gl‑CWP2‑R5:CG GGATCC CCTTCTGCGGACAATAGGCTTG，其为SEQ ID NO：8序列。