[发明专利]一种副溶血性弧菌的恒温扩增检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种副溶血性弧菌的恒温扩增检测试剂盒及检测方法，该试剂盒包含DNA提取试剂、恒温PCR扩增反应液、阳性对照和阴性对照；本发明的检测试剂盒特异性高、灵敏度高；核酸扩增反应全部恒定同一温度，恒温扩增仅需35分钟，核酸试纸条检测结果需1-2分钟，全程从接受样品到获得结果整个检测过程仅需1小时左右，且整个反应过程只需一个恒温仪器，特别适合海产品等食物中毒等现场快速检测与排除使用。

主权项

一种副溶血性弧菌恒温扩增检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括下列组成：(1)DNA提取试剂；(2)恒温PCR扩增反应液，包括：正向外围引物、反向外围引物、两条探针、两条扩增交叉引物、1×Thermol Buffer，MgSO₄，dNTPs溶液，Bst DNA聚合酶和无菌双蒸水；所述正向外围引物为：5′‑TCATCTAAACAATGTTATAGCCA‑3′；反向外围引物为：5′‑GGTTTGGTTTTCTTGCGT‑3′；所述两条探针的序列分别为：正向5’端Biotin标记探针5′‑Biotin‑CTCTTCTTGTAATGGTTATTG‑3′；反向3’端FitC标记探针5′‑Fitc‑CCAACCTTATCACCAGAAATGG‑3′；所述两条扩增交叉引物分别为：扩增正向引物：5′‑CGGGAGTAATGCAGTTAATAGTGTGTTTTTCAATGTGCTTGGGT‑3′；扩增反向引物：5′‑CTTCTGCAGTTGCCGAAGAGCTGATCACTTCAGACGCT‑3′；(3)阳性对照：含有副溶血性弧菌的不耐热溶血素基因(TLH)的DNA质粒；(4)阴性对照：无菌双蒸水。