[发明专利]多西紫杉醇免疫原、抗多西紫杉醇特异性抗体和多西紫杉醇检测试剂

摘要

本发明公开了一种多西紫杉醇免疫原及其合成方法，以及由该免疫原获得的抗多西紫杉醇抗体、检测试剂及其制备方法。本发明的多西紫杉醇免疫原由全新的多西紫杉醇衍生物合成，具有免疫原性高的优点，并且可以诱导得到特异性高和结合力强的抗多西紫杉醇特异性抗体，并且与常见的62种药物无任何交叉反应。由该抗体制备的多西紫杉醇检测试剂，可以方便、精确地确定样品中的多西紫杉醇含量，有利于临床的个体化治疗。与现有技术方法相比，本发明的检测试剂可以实现在全自动生化分析仪上的高通量、快速化检测，且具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，还能有效降低多西紫杉醇检测成本，适合临床大规模推广使用。

主权项

1.一种多西紫杉醇检测试剂的制备方法，其特征在于包含以下步骤：(1)试剂A：将4.036g、11.25mM氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和1.711g、11.25mM葡萄糖‑6‑磷酸用1L 55mM、pH＝8.0的Tris缓冲液溶解制成均相酶底物；将抗多西紫杉醇特异性抗体加到上述均相酶底物中，抗多西紫杉醇特异性抗体与均相酶底物的体积比为1:400；(2)试剂B：将多西紫杉醇酶标偶联物加到120mM、pH＝8.2的Tris缓冲液中，多西紫杉醇酶标偶联物与Tris缓冲液的体积比为1:1500；所述的抗多西紫杉醇特异性抗体的制备方法，包含以下步骤：(Ⅰ)用PBS将多西紫杉醇免疫原稀释至1.0mg/ml，得到抗原溶液，然后用1.0ml抗原溶液与弗氏完全佐剂混合，对实验动物兔进行注射；(Ⅱ)2～3周后，再用1.0ml相同的抗原溶液与弗氏不完全佐剂对上述实验动物兔注射一次，之后每隔四周注射一次，共计注射4次；(Ⅲ)对步骤(Ⅱ)的实验动物兔取血，分离纯化得到效价为1:30000‑1:50000的抗多西紫杉醇特异性抗体；所述的多西紫杉醇免疫原，其结构式如式(Ⅰ)所示：式中，R为‑CO‑(CH2)2‑COO‑，载体为具有免疫原性的牛血清白蛋白；所述的多西紫杉醇酶标偶联物为葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶‑半抗原偶联物。