[发明专利]结核分枝杆菌基因TB-SA荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了结核分枝杆菌基因TB-SA荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法，属于生物技术领域，试剂盒包括样本DNA提取试剂、实时荧光试剂和阳性参控品系列。检测方法包括样本DNA的提纯和标本的检验。本发明建立了比较高效、灵敏的检测样本中的结核分枝杆菌基因TB-SA的方法，提供实时荧光PCR检测试剂盒。提供的检测试剂盒使用方便、操作简便、自动化程度高，有效替代传统检测方法。且试剂盒所用的试剂少，大大简化了操作过程，并减少了在操作过程的污染，检测效果好，特异性强，灵敏度高。

主权项

结核分枝杆菌基因TB‑SA荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括样本DNA提取试剂、实时荧光试剂和阳性参控品系列，所述样本DNA提取试剂包括：A.去污染液：含1％乙酰半胱氨酸的NaOH溶液，30ml；B.DNA提取液：NP‑40溶液，含KCL，Tris；15ml；C.PBS缓冲液：6ml；D.醋酸盐溶液：醋酸钠溶液，1.5ml；所述实时荧光试剂包括：E.PCR反应混合液：含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP，SYBRGreen荧光染料的溶液，750μl；F.PCR引物F：80μl；G.PCR引物R：80μl；H.阳性对照品：1ml；I.阴性对照品：1ml；J.临界对照品：1ml；K.分子生物专用水：500μl；所述阳性参控品系列包括：L.5×10⁵基因拷贝/ul：20ul；M.5×10⁴基因拷贝/ul：20ul；N.5×10³基因拷贝/ul：20ul；O.5×10²基因拷贝/ul：20ul；P.5×10¹基因拷贝/ul：20ul；其中，所述PCR引物F和PCR引物R为合成的特异性TB‑SA基因的DNA片段，PCR引物F的正反向序列分别为：5’‑GCTGGTGATGAGCGTTCAGA‑3’、5’‑TGGACTGTGACTGTGCACTG‑3’；PCR引物R的序列为：5’‑TGGACTGTGACTGTGCACTG‑3’；所述阳性对照品和临界对照品为经灭活处理的结核分枝杆菌；所述阴性对照品为经灭活处理过的非结核菌混合菌；所述阳性参控品系列为提纯的插入TB‑SA基因片段的pDrive/TB‑SA重组质粒。