[发明专利]一种从白眉蝮蛇蛇毒中提取白眉蛇毒血凝酶的方法

摘要

本发明提供了一种从白眉蝮蛇蛇毒中提取效价更高的白眉蛇毒血凝酶的方法。该方法包括下述步骤将长白山白眉蝮蛇蛇毒依次进行DEAE-Sephadex?A-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)离子交换层析、冷藏、碱性水解和Sephadex?G-75凝胶过滤层析后收集的具有凝血活性的蛋白。与现有技术相比，本发明方法简化了白眉蛇毒血凝酶的提取步骤，缩短了生产周期，并且能够提高产品的效价和收率，大幅度地降低生产成本。

主权项

一种从白眉蝮蛇蛇毒中提取白眉蛇毒血凝酶的方法，包括下述步骤：1)将长白山白眉蝮蛇蛇毒溶于pH?7?8、0.04?0.06mol/L的Tris?HCl缓冲液中，得到浓度为200?300g/L的白眉蝮蛇蛇毒液；2)对步骤1)获得的长白山白眉蝮蛇蛇毒液进行离子交换柱层析，所述离子交换柱层析中，固相填充物为DEAE?SephadexA?50，洗脱液为：NaCl浓度为0?0.75mol/L的pH?7?8、0.04?0.06mol/L的Tris?HCl缓冲液，所采用的洗脱方式为梯度洗脱；3)收集步骤2)中的洗脱液；在280nm的波长下对所述洗脱液进行紫外分光光度计检测，收集在280nm的波长下具有吸收峰的洗脱液，并对该洗脱液进行凝血活性检测，合并具有凝血活性的洗脱液；4)向所述具有凝血活性的洗脱液中加入牛血清白蛋白，然后将混合液在4℃环境冷藏4小时，得到冷藏后的混合液；5)碱性水解：向冷藏后的混合液中加入NaOH，使NaOH的浓度为0.05mol/L，然后在37.5±0.5℃环境中反应15—17小时；6)冻干：将步骤5)反应后所得溶液进行冷冻干燥，得到冻干粉；7)将步骤6)获得的冻干粉用注射用水复溶；8)将复溶液进行凝胶过滤层析，所述凝胶过滤层析中固相填充物为Sephadex?G?75，洗脱液为注射用水，收集洗脱液，从中收集具有凝血活性的部分，得到白眉蛇毒血凝酶原液。