[发明专利]双相发酵制备鼠李糖脂条件优化的方法

摘要

本发明提供一种双相发酵制备鼠李糖脂条件优化的方法，该方法步骤如下：1)初步驯化；2)二次驯化；3)三次驯化；4)将步骤3)中驯化得到的菌液稀释分离，挑出若干支单菌落，将菌落接种于发酵培养基中发酵，获得铜绿假单胞菌发酵液；5)碳源优化测定；6)温度优化测定；7)pH优化测定；8)接种量优化。本发明的有益效果是：双相发酵技术，降低了表面活性剂鼠李糖脂的生产工艺成本，优化发酵条件，发酵生产的鼠李糖脂发酵液，液体呈透明状态，培养底物残留低，彻底改变了原来鼠李糖脂发酵液乳化严重的状态，所产生的表面活性剂对煤油乳化效果较好，抗硬水能力强，发泡效果和泡沫稳定。

主权项

双相发酵制备鼠李糖脂条件优化的方法，其特征在于该方法步骤如下：1)初步驯化：将铜绿假单胞菌CICC10204活化培养，将活化培养过的所述铜绿假单胞菌转接至驯化培养基中培养；2)二次驯化：将培养后所述铜绿假单胞菌的菌液以3％‑5％的接种量接种至已灭菌的驯化培养基中培养；3)三次驯化：将经二次驯化培养产出的菌液以3％‑5％的接种量接种至新配制并灭菌的驯化培养基中驯化培养；4)将步骤3)中驯化得到的菌液稀释分离，挑出若干支单菌落，将菌落接种于发酵培养基中发酵，获得铜绿假单胞菌发酵液；5)碳源优化测定：在一定条件下，分别选用淀粉、葡萄糖、乳糖为碳源，将所述铜绿假单胞菌发酵液培养，测定得出不同碳源对应的铜绿假单胞菌发酵液的表面张力值；6)温度优化测定：在步骤5)中确定的优化条件下，在30‑40℃的温度范围中选取不同的培养温度，将所述铜绿假单胞菌发酵液培养一定时间，测定得出不同温度下对应的铜绿假单胞菌发酵液的表面张力值；7)pH优化测定：在步骤6)中确定的优化条件下，将发酵培养基的初始pH调整至5‑9，将所述铜绿假单胞菌发酵液培养一定时间，测定得出不同pH值下对应的铜绿假单胞菌发酵液的表面张力值；8)接种量优化：在步骤7)中确定的优化条件下，选取1％－8％的接种量进行接种发酵培养一定时间，测定得出不同接种量下对应的铜绿假单胞菌发酵液的表面张力值；9)分析比较步骤5)、步骤6)、步骤7)，步骤8)中得到的不同条件下表面张力值结果，获得双相发酵制备鼠李糖脂的优化发酵条件。