[发明专利]一种siRNA-PLGA/CSO共轭物胶束及其制备方法

摘要

本发明公开了一种siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束的制备方法，包括以下步骤：(1)PLGA、DCC、NHS和PDPH制得PLGA‑PDPH；(2)si RNA与PLGA‑PDPH制得siRNA‑PLGA；(3)siRNA‑PLGA与CSO制备siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束。本发明制备方法反应条件温和，操作简便。本发明采用的PLGA和CSO来源广泛，具有低毒和生物可降解的优良特性。本发明还公开了一种siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束。该共轭物胶束提高了siRNA在递送过程中的稳定性，使siRNA免受核酸酶和溶酶体的降解，增大siRNA的细胞摄取率。 1

主权项

1.一种siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束的制备方法，包括以下步骤：

(1)PLGA、DCC和NHS在溶剂甲中反应，处理后制得PLGA‑NHS酯；PLGA‑NHS酯与PDPH在溶剂乙中反应，处理后制得PLGA‑PDPH嫁接物；所述的PLGA分子量为8000～20000，PLGA中两种单体乙交酯与丙交酯的比例为50～75：50～25；

(2)siRNA溶于PBS，PLGA‑PDPH嫁接物溶于DMSO，两种溶液混合后反应，经处理制得siRNA‑PLGA共轭物胶束；

步骤(2)所述的siRNA与PLGA‑PDPH的摩尔比为1：20～50，PBS与DMSO体积比为1:8～12；

步骤(2)所述的siRNA‑PLGA共轭物胶束的粒径为200nm～246nm，表面电位为‑40mV～‑25mV；

(3)将siRNA‑PLGA共轭物胶束与CSO在焦碳酸二乙酯处理水中进行孵育，制得siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束；

步骤(3)所述的CSO分子量为1000～3000，聚合度为6‑8。

2.根据权利要求1所述的siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束的制备方法，其特征在于，步骤(1)PLGA、DCC和NHS的摩尔比为1：2～5：2～5，PLGA‑NHS酯与PDPH的摩尔比为1：1～3。

3.根据权利要求1所述的siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的溶剂甲为二氯甲烷、二甲基甲酰胺、四氢呋喃和N‑甲基吡咯烷酮中的至少一种，所述的溶剂乙为二氯甲烷、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、N‑甲基吡咯烷酮和乙酸乙酯中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的siRNA的正义链3’端或反义链5’端由巯基修饰，siRNA包含19‑30个核苷酸，分子量为10000‑30000。

5.根据权利要求1所述的siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束的制备方法，其特征在于，步骤(3)siRNA‑PLGA共轭物胶束与壳寡糖在N/P比为1～80：1的条件下孵育，孵育温度为10℃～40℃，孵育时间为15min～30min。

6.根据权利要求1‑5任一所述的siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束的制备方法制得的siRNA‑PLGA/CSO共轭物胶束，粒径为150nm‑200nm，表面电位为‑18mV～40mV。