[发明专利]非动物源性防冻液及其对食蟹猴精液的冷冻保存方法

摘要

本发明公开了一种非动物源性防冻液及其对食蟹猴精液的冷冻保存方法，该防冻液由0.2g Tris、1.2g TES、2g 乳糖、2g 葡萄糖、0.2g 棉籽糖、10000IU 青霉素G钠盐、5mg硫酸链霉素依次溶于80mL Milli-Q 超纯水中，混合均匀后加Milli-Q 超纯水定容至100mL，用1N NaOH 或1N HCl调节pH至7.0-7.2，制成稀释液，再取稀释液，加入甘油制成2×防冻液；本发明杜绝了体外受精或人工受精系统中引入致病性因子的风险，便于更好地理解精子低温冷冻损伤机制以及冷冻保护机理，对防冻液的质控也易于进行。

主权项

一种非动物源性防冻液及其对食蟹猴精液的冷冻保存方法，其特征在于，步骤如下：    （1） 取0.2g Tris、1.2g TES、2g 乳糖、2g 葡萄糖、0.2g 棉籽糖、10000IU 青霉素G钠盐和5mg 硫酸链霉素，依次溶于80mL Milli‑Q 超纯水中，混合均匀后加Milli‑Q 超纯水定容至100mL，用1N NaOH 或1N HCl调节pH至7.0‑7.2，制成稀释液；    （2）取18mL稀释液，加入2mL的甘油制成2×防冻液；    （3）在室温下，将食蟹猴精液与所述稀释液按1：9的体积比在试管中混合并放置1小时，得稀释精液；    （4）室温下，所得稀释精液中加入等体积的、含甘油的2×防冻液，混匀后于室温平衡30分钟得防冻精液；    （5）将防冻精液吸入0.25 mL冷冻麦管并封口, 然后将麦管转入4℃冰箱缓慢降温45分钟；    （6）将降温后的麦管置于液氮面上方5cm 处熏蒸冷冻10分钟后投入液氮中保存；    （5）复苏时将冷冻麦管由液氮中迅速转移至37℃的水浴中解冻2分钟。