[发明专利]一种基于生物多样性信息分离反硝化脱硫细菌的方法

摘要

一种基于生物多样性信息分离反硝化脱硫细菌的方法，它涉及反硝化脱硫细菌的筛选方法。本发明的方法：首先采集污泥，然后对污泥样品进行高通量测序，分析其菌群丰度波动和空间生态分布信息，根据群落组成与结构特点，采取不同的筛选方法。在不同的筛选方法下，对目标菌属采用夹层培养基进行厌氧培养，挑取单菌落进行分离培养，反复多次后，得单一菌落。共筛选到两类反硝化脱硫菌株，一类为自养反硝化脱硫菌即硫杆菌属；一类为异养反硝化脱硫菌，分别属于索氏菌属、固氮弧菌属、弓形杆菌属、苍白杆菌属。菌株筛选结果与高通量测序结果所显示的群落结构信息一致，为强化废水生物处理效能提供了微生物资源。此外，还对这些菌株的代谢特征进行了鉴定。

主权项

一种基于生物多样性信息分离反硝化脱硫细菌的方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：一、从稳定运行的进行生物脱硫脱氮的膨胀颗粒污泥床反应器采集污泥样品；二、采用的高通量测序技术对污泥样品进行群落空间结构与丰度分析，获得生物学多样性信息；其中，所述的生物学多样性信息是指：菌群丰度波动和空间生态分布信息；同时将步骤一中采集的污泥按体积比为1:5的比例加入无菌水，同时放入玻璃珠，在转速为220转/分钟的条件下振荡培养24小时，得各菌属的悬液；三、对步骤二各菌属的菌液稀释后，涂布于与各菌属对应的固体培养基上，然后在其上浇盖与该菌属对应的固体培养基，制成各菌属的厌氧夹层培养基，在恒温培养箱温度为30℃的条件下进行厌氧培养至培养基夹层中产生气泡；四、剥离步骤三中各菌属的厌氧夹层培养基的覆盖部分，挑取气泡内的各菌属的单菌落，转入各菌属对应的液态分离培养基中，进行扩大培养，在恒温培养箱30℃，培养周期为14天；五、取步骤四培养后各菌属的菌液，在各菌属对应的固体培养基上进行平板划线培养；然后置于恒温培养箱中，在30℃条件下进行培养至出现单菌落，挑取各菌属的单菌落转入各菌属对应的液态培养基中培养；六、重复步骤三至步骤五的操作3次，分离出各菌属的单一菌落后，即完成从有机废水生物脱硫脱氮系统中分离反硝化脱硫功能微生物的筛选；其中，步骤二中悬液中包含以下菌属：索氏菌属(Thauera sp.)、固氮弧菌属(Azoarcus sp.)、弓形杆菌属(Arcobacter sp.)、苍白杆菌属(Ochrobactrum sp.)、硫杆菌属(Thiobacillus sp.)、硫螺旋菌属(Sulfurimonas sp.)、产碱杆菌属(Alkaliflexus sp.)、脱硫弧菌属(Desulfofutls sp.)和地杆菌属(Geoalkalibacter sp.)。