[发明专利]用于提高莱鲍迪苷D和莱鲍迪苷M之产生的方法

摘要

本发明提供了用于重组产生甜菊醇糖苷的方法和包含甜菊醇糖苷的组合物。

主权项

1.在以下基因表达的条件下能够在细胞培养物中产生甜菊醇糖苷组合物的重组宿主细胞，其包含：(a)编码能够从法尼基二磷酸(FPP)和异戊烯基二磷酸(IPP)合成牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(GGPP)之多肽的基因；(b)编码能够从GGPP合成内部柯巴基二磷酸之多肽的基因；(c)编码能够从内部柯巴基焦磷酸合成内部‑贝壳杉烯之多肽的基因；(d)编码能够从内部‑贝壳杉烯合成内部‑异贝壳杉烯酸之多肽的基因；(e)编码能够从内部‑异贝壳杉烯酸合成甜菊醇之多肽的基因；(f)编码能够还原细胞色素P450复合物之多肽的基因；(g)编码能够使甜菊醇糖苷的13‑O‑葡萄糖、19‑O‑葡萄糖、或13‑O‑葡萄糖和19‑O‑葡萄糖二者的C2’位β‑1，2糖基化之第一多肽的第一基因；其中所述基因具有两个或更多个拷贝数；并且其中所述第一多肽为SEQ ID NO：16所示氨基酸序列；以及编码能够使甜菊醇糖苷的13‑O‑葡萄糖、19‑O‑葡萄糖、或13‑O‑葡萄糖和19‑O‑葡萄糖二者的C2’位β‑1，2糖基化之第二多肽的第二基因；其中所述第二多肽为SEQ ID NO：15、66或86中任一所示氨基酸序列；(h)编码能够使所述甜菊醇糖苷的13‑O‑葡萄糖、19‑O‑葡萄糖、或13‑O‑葡萄糖和19‑O‑葡萄糖二者的C3’位β‑1，3糖基化之多肽的基因；(i)编码能够在甜菊醇或甜菊醇糖苷的C‑13羟基处将其糖基化之多肽的基因；以及(j)编码能够在甜菊醇或甜菊醇糖苷的C‑19羧基处将其糖基化之多肽的基因；其中至少一种所述基因是重组基因；其中所述甜菊醇糖苷包含甜菊醇‑13‑O‑葡糖苷、甜菊醇‑19‑O‑葡糖苷、覆盆子苷、甜菊苷、甜菊醇‑1，2‑二糖苷、莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷B、莱鲍迪苷D或莱鲍迪苷E；其中由所述宿主细胞产生的所述甜菊醇糖苷组合物包含由所述宿主细胞以至少600mg/L细胞培养物的浓度产生的莱鲍迪苷M；其中所述重组宿主细胞包括昆虫细胞、真菌细胞或细菌细胞；并且其中所述重组宿主不是植物和/或植物细胞。