[发明专利]使用截短的引导RNA(tru-gRNA)提高RNA引导的基因组编辑的特异性

摘要

CRISPR‑Cas基因组编辑使用引导RNA将Cas9核酸酶导向靶DNA，所述引导RNA包括通过碱基配对结合靶DNA的互补区和Cas9结合区。还公开了通过使用截短的引导RNA(tru‑gRNA)，使用CRISPR/Cas9系统提高RNA引导的基因组编辑的特异性的方法。

主权项

1.一种在细胞中提高RNA引导的基因组编辑的特异性的方法，所述方法包括将所述细胞与引导RNA接触，所述引导RNA包括与选定的靶基因组序列的互补链的17‑18个连续核苷酸互补的由17‑18个核苷酸组成的互补区，其中所述选定的靶基因组序列紧接前间区序列邻近基序(PAM)的5’，并且其中所述引导RNA选自由以下组成的组：(X_17‑18)GUUUUAGAGCUA(SEQ ID NO:2404)；(X_17‑18)GUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUG(SEQ ID NO:2407)；或(X_17‑18)GUUUUAGAGCUAUGCU(SEQ ID NO:2408)；(X_17‑18)GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCG(SEQ ID NO:1)、(X_17‑18)GUUUUAGAGCUAUGCUGAAAAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUC(SEQ ID NO:2)、(X_17‑18)GUUUUAGAGCUAUGCUGUUUUGGAAACAAAACAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUC(SEQ ID NO:3)、(X_17‑18)GUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC(SEQ ID NO:4)、(X_17‑18)GUUUAAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC(SEQ ID NO:5)；(X_17‑18)GUUUUAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC(SEQ ID NO:6)；和(X_17‑18)GUUUAAGAGCUAUGCUGGAAACAGCAUAGCAAGUUUAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC(SEQ ID NO:7)；其中X_17‑18是与选定的靶基因组序列的互补链的17‑18个连续核苷酸互补的互补区；(i)单一引导RNA，其包括与选定的靶基因组序列的互补链的17‑18个连续核苷酸互补的由17‑18个核苷酸组成的互补区，或(ii)crRNA，其包括与选定的靶基因组序列的互补链的17‑18个连续核苷酸互补的由17‑18个核苷酸组成的互补区，以及tracrRNA，由此在细胞中提高RNA引导的基因组编辑的特异性。