[发明专利]用于以单氨基酸分辨率确定可突变配体-GPCR结合的方法以及突变配体和GPCR对

摘要

本发明提供了用于确定G蛋白偶联受体(以下称为“GPCR”)与可突变配体之结合能力的方法，所述方法包括以下步骤：a)提供具有以具有第一数目的行和第二数目的列之阵列设置的孔的孔微量滴定板；b)向每个所述孔提供GPCR，例如视紫红质；c)提供亲本配体的多个突变体，其中所述亲本配体是当GPCR处于特定构象时与所述GPCR结合的配体；d)在亲本配体会与GPCR偶联的条件下使孔中亲本配体的突变体与GPCR接触；以及e)对于每一个突变体，通过测定所述孔中偶联的突变体-GPCR复合物的量来确定，跟所述亲本配体与所述GPCR的标准结合能力相比，该突变配体具有更弱结合能力还是具有更强结合能力。在测定中，研究了覆盖完整视紫红质抑制蛋白序列的403个突变体与视紫红质的结合。该信息提供了无活性视紫红质抑制蛋白、预活化的视紫红质抑制蛋白和活性视紫红质抑制蛋白之晶体结构的功能性第四维度。所得单氨基酸分辨率功能图揭示了在视紫红质抑制蛋白活化期间被破坏的在极性核中并且沿着视紫红质抑制蛋白的C尾的一系列关键相互作用。我们的数据还揭示了强烈降低结合并充当与视紫红质的直接结合界面的若干氨基酸片。该信息与活性视紫红质抑制蛋白⁴和光活化视紫红质之计算机分子对接的组合允许开发视紫红质抑制蛋白-视紫红质复合物模型。突变体的组合允许改变GPCR-配体复合物的结合亲和力和稳定性以用于诊断目的或药理学介入。

主权项

用于确定G蛋白偶联受体与可突变配体之结合能力的方法，所述G蛋白偶联受体在下文中称为GPCR，所述方法包括以下步骤：a.提供具有以第一数目的行和第二数目的列设置之孔的孔微量滴定板；b.向每个所述孔提供GPCR，例如视紫红质；c.提供亲本配体的多个突变体，其中所述亲本配体是当GPCR处于特定构象时与所述GPCR结合的配体；d.在所述亲本配体会与所述GPCR偶联的条件下使所述孔中的所述亲本配体的突变体与所述GPCR接触；以及e.对于每一个突变体，通过测定所述孔中偶联的突变体‑GPCR复合物的量来确定，跟所述亲本配体与所述GPCR的标准结合能力相比，该突变配体具有更弱结合能力还是具有更强结合能力。