[发明专利]用于监测肽的细胞运输的方法

摘要

本公开内容提供一种分离具有细胞-穿膜功能的肽的方法，其中所述肽仅在其易位通过细胞膜之后作为生物素化的分子被检测。本公开内容还提供用于验证所述肽的细胞-穿膜功能的方法，或者该方法本身可以用于分离所述肽，其中所述可通过其将可检测的被载物运输进入胞质的能力来检测，例如，被载物毒素或功能性GFP的互补所需的绿色荧光蛋白(GFP)的片段。本公开内容还提供具有细胞-穿膜功能的非典型肽，其与已知的CPP例如TAT、VP22、转运子和穿膜肽具有结构差异，并且其能够对细胞膜易位且逃避内体。该公开的肽具有在治疗性和诊断性地将被载物运输进入细胞中的应用。

主权项

一种确定或鉴定能够对细胞的膜易位的肽的方法，所述方法包括如下步骤：(i)使表达生物素连接酶的宿主细胞与多个非生物素化的组分接触，其中，所述组分包含支架展示融合蛋白，各融合蛋白包含候选肽部分和生物素连接酶底物结构域，并且其中，所述接触的时间和条件足够至少使组分的展示的融合蛋白进入所述宿主细胞；(ii)孵育所述宿主细胞，所述孵育的时间和条件至少使已对所述宿主细胞的膜易位的融合蛋白的生物素连接酶底物结构域被表达的生物素连接酶酶促生物素化；和(iii)通过进行如下过程来确定或鉴定已对所述宿主细胞的膜易位的候选肽部分：(a)检测宿主细胞或细胞裂解物或其提取物中生物素化的融合蛋白的存在，其中，生物素化的融合蛋白的存在指示所述候选肽部分已对所述细胞膜易位；和/或(b)从宿主细胞或细胞裂解物或其提取物至少分离生物素化的融合蛋白；和/或(c)从宿主细胞或细胞裂解物或其提取物至少回收生物素化的融合蛋白。