[发明专利]一种多能干细胞定向分化为功能性心肌的方法

摘要

本发明涉及一种用于从多能干细胞中生产生物工程化心肌(BHM)的方法，所述方法通常包括，通过定向组织形成，诱导中胚层分化、心肌分化和心肌成熟的步骤。该方法是一种稳健的、无血清的且可再生的生产用于多种应用的BHM的途径，并且可应用于多种多能干细胞系。本发明还涉及通过本文公开的方法生产的BHM，以及所述BHM在药物和毒性筛选中的用途，和其在医药中的用途。

主权项

一种用于从多能干细胞生产生物工程化心肌的方法，所述方法包括如下步骤：(i)在基础培养基中培养多能干细胞，所述基础培养基包含有效量的(a)BMP4、激活素A、FGF2、GSK3‑抑制剂，和(b)得到终浓度为0.5‑50mg/ml白蛋白、1‑100μg/ml转铁蛋白、0.1‑10μg/ml乙醇胺、0.003‑0.3μg/ml亚硒酸钠、0.4‑40μg/ml L‑肉碱HCl、0.1‑10μg/ml氢化可的松、0.05‑5μl/ml脂肪酸补充剂、0.0001‑0.1μg/ml三碘‑L‑甲状腺原氨酸(T3)的无血清补充剂，由此诱导所述多能干细胞的中胚层分化；(ii)在基础培养基中培养步骤(i)中得到的细胞，所述基础培养基包含有效量的Wnt‑信号传导通路抑制剂和如步骤(i)中的无血清补充剂，由此诱导所述细胞的心肌分化；和(iii)在机械刺激下，在基础培养基中培养步骤(ii)中得到的细胞，所述基础培养基包含有效量的如步骤(i)中的无血清补充剂，由此促进心肌成熟；其中，所述多能干细胞不是采用涉及改变人类种系遗传特性或涉及用于工业或商业目的的人胚胎的用途的工艺生产的。