[发明专利]一种基于发根农杆菌介导的板栗转基因方法

摘要

本发明提出了一种基于发根农杆菌介导的板栗转基因方法，利用含35S：：DsRed报告基因的发根农杆菌MSU440侵染北京主栽板栗品种“燕山红栗”无菌苗下胚轴，获得共转化植株，进而得到转化毛状根。采用本发明提出的“燕山红栗”下胚轴转化方法不仅可以大大缩短转化周期（1个月），也可以直观的看到实验结果；以“燕山红栗”离体毛状根体系进行根系发育方面的研究可以人为控制培养条件，消除环境因素带来的影响；此外，该方法可以克服‘燕山红栗’实生苗根系因土壤环境给观察、取样带来的困难，从而有望改变板栗根系研究相对落后的现状。本发明为板栗基因功能验证提供了一种快速可靠的方法，也为板栗基因的遗传改良提供一种新的转化方法。

主权项

一种发根农杆菌介导的板栗转基因方法，其特征在于，包括以下步骤：制备板栗无菌苗；发根农杆菌活化，将发根农杆菌在LB固体培养基上划线，以获得单菌落，挑取单菌落于LB液体培养基上，经暗培养；侵染外植体，将板栗无菌苗下胚轴切除，在伤口处涂抹已活化的发根农杆菌，然后将其放在共培养基上，经光照培养；共培养；发根培养；荧光检测。