[发明专利]净化3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮复合亲和柱

摘要

本发明公开了专利涉及一种净化3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮复合亲和柱及其制备方法与应用。采用4％的柱状琼脂糖凝胶作为固相载体，琼脂糖凝胶与抗体偶联形成免疫吸附剂，装柱制成免疫亲和柱。当含有3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的样品通过免疫亲和柱时，免疫吸附剂就会特异性的吸附3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮，其他的杂质则流出免疫亲和柱，然后用甲醇将3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮从柱子中洗脱下来，样品得到了很好的净化。

主权项

一种净化3‑乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮复合亲和柱，其特征在于，制备方法如下：a)基质制备称取1g琼脂糖凝胶基质粉末，溶于1mmol/L HCl中，然后置于烧结玻璃过滤器中使用1mmol/L HCl洗涤15min；b)配体偶联使用偶联缓冲液0.2mol/L NaHCO3 pH8.3溶解待偶联的3‑乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体、黄曲霉毒素抗体、赭曲霉毒素A抗体和玉米赤霉烯酮抗体4种抗体，获得抗体溶液，迅速将步骤a)活化的琼脂糖凝胶基质转移到所述抗体溶液中，充分混匀上述的混和物2‑4h；c)配体封闭封闭所有残留的活性基团，转移经步骤b)处理的琼脂糖凝胶基质至0.1mol/L Tris‑HCl缓冲液中，室温条件下静置2‑4h；d)除去偶联后未偶联上的多余的配体依次用0.1mol/L醋酸/醋酸钠缓冲液和0.1mol/L Tris‑HCl缓冲液对经步骤c)处理后的琼脂糖凝胶基质进行洗涤，至少洗涤3个循环；e)装柱用5倍所述琼脂糖凝胶体积的0.01％ NaN3‑PBS洗涤，并使用0.01％NaN3‑PBS保存，然后装柱。